【摘 要】
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目的·探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰在顺铂诱导的小鼠急性肾损伤进程中的作用.方法·选择4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射顺铂(20mg/kg)诱导急性肾损伤(损伤组);另取4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射等量生理盐水(对照组).检测2组小鼠血清肌酐及血尿素氮水平变化,观察小鼠肾脏组织切片中病理损伤情况,评估模型是否成功.进一步运用甲基化RNA免疫共沉淀技术(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)与RNA测序技术分
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科,上海200127;江苏省涟水县人民医院肾脏科,涟水223400
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目的·探讨N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化修饰在顺铂诱导的小鼠急性肾损伤进程中的作用.方法·选择4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射顺铂(20mg/kg)诱导急性肾损伤(损伤组);另取4只C57bL/6小鼠,尾静脉注射等量生理盐水(对照组).检测2组小鼠血清肌酐及血尿素氮水平变化,观察小鼠肾脏组织切片中病理损伤情况,评估模型是否成功.进一步运用甲基化RNA免疫共沉淀技术(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)与RNA测序技术分别检测2组小鼠肾脏组织中m6A甲基化水平与RNA表达变化.运用基因本体论及京都基因和基因组数据库进行结果可视化和综合研究,并将RNA测序技术所得转录组数据与MeRIP技术检测所得表观遗传数据联合分析,寻找参与顺铂诱导急性肾损伤病理变化过程的候选基因.结果·顺铂可诱导小鼠血清肌酐与血尿素氮水平显著升高.光学显微镜观察肾组织发现广泛的肾小管空泡变性,上皮细胞剥脱,肾小管坏死,提示造模成功.MeRIP检测发现损伤组与对照组小鼠肾脏中共有2 227个基因含有2 981个差异化表达的m6A甲基化位点(表达变化倍数≥2且P<0.05),这些基因主要富集于代谢及细胞死亡通路.表达差异化m6A甲基化位点的基因与RNA差异化表达基因的联合分析发现1 002个表达趋势相同的基因,如纤维蛋白原α链、溶质载体12家族成员1和甲肝病毒细胞受体1等.结论·顺铂可诱导肾脏组织中基因mRNA上m6A甲基化位点的甲基化水平变化,促进急性肾损伤进程.
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