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【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2015）04
【摘要】目的：制定金钗石斛洋参胶囊中总皂苷的含量测定标准。方法：用分光光度法测定总皂苷的含量进行实验研究。结果：本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。结论：用分光光度法测定金钗石斛洋参胶囊中总皂苷的含量，能有效控制金钗石斛洋参胶囊内在质量。
【关键词】含量测定 分光光度法 金钗石斛洋参胶囊 总皂苷
1.实验仪器与试药
AUW120D型电子天平（上海天平仪器厂）、四孔恒温水浴锅（昆山市检测仪器厂）、GBC Cintra 20 型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、KQ-250B 型超声波清洗器、PT-大孔吸附树脂柱；金钗石斛洋参胶囊（批号：20130401、20130402、20130403）；95%乙醇、5%香草醛溶液、甲醇、高氯酸、冰醋酸等试剂均为分析纯；人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品鉴定所）。
2.实验原理
样品中总皂苷经提取、Amberlite-XAD-2大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷Re生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm除比色测定。
3.试样配制
3.1 人参皂苷Re标准溶液：精密称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即得2.0mg/mL的人参皂苷Re标准溶液。
3.2 供试品处理：取金钗石斛洋参胶囊内容物2g置具塞锥形瓶中，加入40mL 85%乙醇，超声提取30min，滤过，精密移取滤液10mL，水浴挥干溶剂，残渣加蒸馏水溶解并定容至 10mL，摇匀，放置，吸取1mL进行柱分离。
3.3 柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，在用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液，25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。作为显示用。
4.操作步骤
在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰醋酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL闭塞管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min，冷却后准确加入冰醋酸5.0mL，摇匀后以相应试剂为空白，于560nm处测定吸光度，计算试样中总皂苷含量。
5.计算和结果表示
计算公式 【式中：X—试样中总皂苷的含量（mg/100g）；C—从标准曲线上读出供试品溶液中含人参皂苷Re的重量（μg）； S—稀释倍数；M—供试品重量（g）。】
计算结果保留小数点后两位。允许偏差 相对平均偏差（x±s）不得过2.0%。
6.方法学研究
6.1 标准曲线的制备：准确吸取人参皂苷Re标准品溶液：吸取人参皂苷Re标准品溶液0、20、40、60、80、100μL，分别置于25mL比色管中，用氮气吹干，以上述显色方法显色，以相应试剂为空白，在560nm的波长处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程和相关系数分别为Y=0.0031X+0.0061，X2=0.9993（n=6）。结果表明人参皂苷Re在40～200μg范围内呈良好的线性关系。
6.2 精密度考察试验：取批号为“130401”的样品2g，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”连续测定6次，计算RSD值。结果RSD%值为0.23%，说明仪器的精密度良好。
6.3 显色稳定性考察试验：取批号为“130401”的样品2g，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”分别于0、10、20、30、40、60、90min测定的吸光度，计算RSD值为0.30%，表明样品溶液在90min内基本稳定，故应在样品显色后90min内测定其吸光度。
6.4 重复性考察试验：取批号为“130401”的样品2g，精密称定，6份，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”测定其吸光度，计算含量，结果平均含量为190.0mg/100g，RSD%为0.42%，表明重复性良好。
6.5 加样回收试验试验：取批号为“130401”的样品1g，精密称定，6份，精密加入浓度为0.94mg/ml人参皂苷Re标准品1mL，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.1项下“测定法”测定其吸光度，计算含量。结果计算回收率为97.60%，RSD%为1.23%。
6.6 样品中总皂苷的含量测定：分别取批号为“130401”，“130402”，“130403”的样品2g，按5.2、5.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”测定，每个批号取3个平行样，测得总皂苷的含量平均值分别为190.3mg/100g、189.6mg/100g、189.3mg/100g、均符合规定（规定本品每100g含总皂苷以人参皂苷Re计不得少于120mg）。
7.讨论
根据三批样品多糖含量测定结果，规定本品含总皂苷不得少于189.3（mg/100g）。金钗石斛洋参胶囊含有较多的总皂苷成分，有些具有重要的生理活性，测定皂苷含量可以有效地控制其内在质量。采用分光光度法测定皂苷含量，操作简便、灵敏度高、准确，能较好地控制金钗石斛洋参胶囊的质量。
项目名称：贵州省科技计划项目。
作者简介：雷华鼎，执业中药师，贵州仁堂药业有限公司副总工程师、项目部经理，从事药品质量研究、生产质量管理、中药材种植技术研究。
参考文献
[1]王卫霞，王谦.人参皂苷的免疫调节作用及其应用[J].中华中医药杂志，2005， 20（4）：234.
[2] 赵珺彦，周大兴，翟鹏贵.西洋参提取物增强免疫力作用的实验研究[J].浙江中医药大学学报，2011，35（5）：755-757.
[3] 王卫霞，王谦.人参皂苷的免疫调节作用及其应用[J].中华中医药杂志，2005，20（4）：234.
【摘要】目的：制定金钗石斛洋参胶囊中总皂苷的含量测定标准。方法：用分光光度法测定总皂苷的含量进行实验研究。结果：本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。结论：用分光光度法测定金钗石斛洋参胶囊中总皂苷的含量，能有效控制金钗石斛洋参胶囊内在质量。
【关键词】含量测定 分光光度法 金钗石斛洋参胶囊 总皂苷
1.实验仪器与试药
AUW120D型电子天平（上海天平仪器厂）、四孔恒温水浴锅（昆山市检测仪器厂）、GBC Cintra 20 型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、KQ-250B 型超声波清洗器、PT-大孔吸附树脂柱；金钗石斛洋参胶囊（批号：20130401、20130402、20130403）；95%乙醇、5%香草醛溶液、甲醇、高氯酸、冰醋酸等试剂均为分析纯；人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品鉴定所）。
2.实验原理
样品中总皂苷经提取、Amberlite-XAD-2大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷Re生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm除比色测定。
3.试样配制
3.1 人参皂苷Re标准溶液：精密称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即得2.0mg/mL的人参皂苷Re标准溶液。
3.2 供试品处理：取金钗石斛洋参胶囊内容物2g置具塞锥形瓶中，加入40mL 85%乙醇，超声提取30min，滤过，精密移取滤液10mL，水浴挥干溶剂，残渣加蒸馏水溶解并定容至 10mL，摇匀，放置，吸取1mL进行柱分离。
3.3 柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，在用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液，25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。作为显示用。
4.操作步骤
在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰醋酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL闭塞管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min，冷却后准确加入冰醋酸5.0mL，摇匀后以相应试剂为空白，于560nm处测定吸光度，计算试样中总皂苷含量。
5.计算和结果表示
计算公式 【式中：X—试样中总皂苷的含量（mg/100g）；C—从标准曲线上读出供试品溶液中含人参皂苷Re的重量（μg）； S—稀释倍数；M—供试品重量（g）。】
计算结果保留小数点后两位。允许偏差 相对平均偏差（x±s）不得过2.0%。
6.方法学研究
6.1 标准曲线的制备：准确吸取人参皂苷Re标准品溶液：吸取人参皂苷Re标准品溶液0、20、40、60、80、100μL，分别置于25mL比色管中，用氮气吹干，以上述显色方法显色，以相应试剂为空白，在560nm的波长处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程和相关系数分别为Y=0.0031X+0.0061，X2=0.9993（n=6）。结果表明人参皂苷Re在40～200μg范围内呈良好的线性关系。
6.2 精密度考察试验：取批号为“130401”的样品2g，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”连续测定6次，计算RSD值。结果RSD%值为0.23%，说明仪器的精密度良好。
6.3 显色稳定性考察试验：取批号为“130401”的样品2g，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”分别于0、10、20、30、40、60、90min测定的吸光度，计算RSD值为0.30%，表明样品溶液在90min内基本稳定，故应在样品显色后90min内测定其吸光度。
6.4 重复性考察试验：取批号为“130401”的样品2g，精密称定，6份，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”测定其吸光度，计算含量，结果平均含量为190.0mg/100g，RSD%为0.42%，表明重复性良好。
6.5 加样回收试验试验：取批号为“130401”的样品1g，精密称定，6份，精密加入浓度为0.94mg/ml人参皂苷Re标准品1mL，按3.2、3.3项下方法制备供试品溶液，按6.1项下“测定法”测定其吸光度，计算含量。结果计算回收率为97.60%，RSD%为1.23%。
6.6 样品中总皂苷的含量测定：分别取批号为“130401”，“130402”，“130403”的样品2g，按5.2、5.3项下方法制备供试品溶液，按6.项下“测定法”测定，每个批号取3个平行样，测得总皂苷的含量平均值分别为190.3mg/100g、189.6mg/100g、189.3mg/100g、均符合规定（规定本品每100g含总皂苷以人参皂苷Re计不得少于120mg）。
7.讨论
根据三批样品多糖含量测定结果，规定本品含总皂苷不得少于189.3（mg/100g）。金钗石斛洋参胶囊含有较多的总皂苷成分，有些具有重要的生理活性，测定皂苷含量可以有效地控制其内在质量。采用分光光度法测定皂苷含量，操作简便、灵敏度高、准确，能较好地控制金钗石斛洋参胶囊的质量。
项目名称：贵州省科技计划项目。
作者简介：雷华鼎，执业中药师，贵州仁堂药业有限公司副总工程师、项目部经理，从事药品质量研究、生产质量管理、中药材种植技术研究。
参考文献
[1]王卫霞，王谦.人参皂苷的免疫调节作用及其应用[J].中华中医药杂志，2005， 20（4）：234.
[2] 赵珺彦，周大兴，翟鹏贵.西洋参提取物增强免疫力作用的实验研究[J].浙江中医药大学学报，2011，35（5）：755-757.
[3] 王卫霞，王谦.人参皂苷的免疫调节作用及其应用[J].中华中医药杂志，2005，20（4）：234.