【摘 要】
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目的 基于逆转录-酶促重组等温扩增技术（reverse transcription-enzymatic recombinase amplification，RT-ERA），以MS2作为模式过程控制病毒，建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒（Norovirus， NoV）双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法 分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中，通过体外转录的方式获
【机 构】
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中国检验检疫科学研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全)
【基金项目】
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中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项（2022JK36）； 国家重点研发计划（2018YFC1603606）；
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目的 基于逆转录-酶促重组等温扩增技术（reverse transcription-enzymatic recombinase amplification，RT-ERA），以MS2作为模式过程控制病毒，建立一种贝类食品中GI与GII型诺如病毒（Norovirus， NoV）双重荧光RT-ERA快速检测方法。方法 分别将GI、GII NoV参考靶序列克隆到带有T7启动子的载体中，通过体外转录的方式获得高纯度NoV RNA参考样品。以设计的MS2噬菌体引物探针，与实验室前期筛选的GI、GII NoV引物探针进行双重荧光RT-ERA试验，并对反应体系和反应程序进行优化，分析方法的灵敏度。最后，采用建立的方法开展真实样本检测，以GB 4789.42–2016为参比方法进行检测结果对比，确定方法的准确性和可行性。结果 建立了MS2与GI、MS2与GII两组双重荧光RT-ERA检测方法，最佳引物及探针体积分别为4.1 μL与1.8 μL，检测时间可缩短至10 min左右，且最低可检出102拷贝/μL的NoV核酸样品。应用所建立的方法对29份真实样品进行检测，检测结果与GB 4789.42–2016一致。结论 本研究建立的双重荧光RT-ERA检测方法可实现对MS2、GI和GII NoV的同时检测，且灵敏度高，准确性强，为今后NoV现场快速检测奠定了一定的基础。
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