由已建立的腹水来源卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系中分离侧群(SP)细胞,鉴定SP细胞作为肿瘤干细胞样细胞的生物学特征,并对其进行耐药性分析。
方法采用流式细胞仪分选该卵巢癌细胞系中的SP细胞;分别在体外分化条件下培养SP及非侧群(NSP)细胞,并分别测定其SP细胞比例用于比较其体外分化及自我更新能力;将SP及NSP细胞接种于非肥胖性糖尿病-严重免疫缺陷(NOD-SCID)小鼠的皮下及腹腔,比较SP及NSP细胞的成瘤率;采用活细胞计数法(CCK-8法)检测SP、NSP及未分选卵巢癌细胞(未分选细胞)对顺铂的耐药性,以50%抑制浓度(IC50)表示。
结果分选前的腹水来源卵巢癌细胞中,SP细胞比例为(4.81±0.43)%,从该卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞。SP细胞经体外分化培养,3周后其中SP细胞比例为(4.89±0.33)%,与分选前SP细胞比例相近,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);而NSP细胞经体外分化培养,3周后其中SP细胞比例仅为(0.10±0.03)%,明显低于分选前SP细胞比例(P<0.01)。皮下接种1.0×103个SP细胞6周后3只小鼠全部成瘤,皮下成瘤率为3/3,而接种1.0×104个NSP细胞12周后3只小鼠均未成瘤,皮下成瘤率为0,两者皮下成瘤率比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时,腹腔接种相同数量的SP、NSP细胞后其成瘤能力与皮下接种后相似;原发肿瘤与移植瘤经HE染色和免疫组化染色显示,原发肿瘤与移植瘤均为卵巢低分化浆液性乳头状囊腺癌,均表达卵巢浆液性乳头状囊腺癌标志物CA125。SP、NSP、未分选细胞的顺铂IC50值分别为(2.33±0.14)、(1.60±0.04)、(1.81±0.03)μg/ml, SP细胞的顺铂IC50值明显高于NSP及未分选细胞(P<0.05);以上述未分选细胞的顺铂IC50进一步处理后,未分选细胞中SP细胞比例为(40.10±4.22)%,明显高于顺铂处理前的SP细胞比例[为(4.81±0.43)%;P<0.01];以上述SP细胞的顺铂IC50进一步处理后,SP细胞的存活率为(58.7±3.3)%,再予维拉帕米拮抗后其存活率下降为(7.2±1.3)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论腹水来源卵巢癌细胞系中可持续、稳定地分离出SP细胞,分离出的SP细胞占整个肿瘤细胞群体中的极少数,具有自我更新和分化能力,可再现原发肿瘤的表型,具有干细胞样细胞的生物学特征,并且对卵巢癌一线化疗药物顺铂耐药。