【摘 要】
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目的 观察血红素加氧酶-1(reme oxygehase-1,HO-1)活性改变对人肺腺癌A549细胞失巢凋亡的影响.方法 将野生型HO-1 (wtHO-1)和失活突变体mHO-1G143H基因与质粒pcDNA3.1(+)连接
【机 构】
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哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 哈尔滨市,黑龙江省中医研究院 哈尔滨市
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目的 观察血红素加氧酶-1(reme oxygehase-1,HO-1)活性改变对人肺腺癌A549细胞失巢凋亡的影响.方法 将野生型HO-1 (wtHO-1)和失活突变体mHO-1G143H基因与质粒pcDNA3.1(+)连接,构建野生型和突变型HO-1真核表达载体pcDNA3.1(+)-wtHO-1和pcDNA3.1(+)-mHO-1G143H.利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染人肺腺癌A549细胞构建稳转细胞系,以空载体转染作为对照组.通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的人肺腺癌A549细胞系.利用RT-PCR及Western印迹方法检测各稳转细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平.悬浮培养上述稳转细胞系,建立失巢凋亡模型;应用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 与空载体对照组相比,野生型HO-1过表达细胞系中,细胞失巢凋亡率明显下降；突变型HO-1过表达细胞系中,细胞失巢凋亡率增高.结论 HO-1过表达可能抑制肺腺癌A549细胞的失巢凋亡能力,这种作用可能与HO-1催化活性相关.
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