【摘 要】
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目的:探讨乙酰肝素酶shRNA抑制人卵巢癌细胞系乙酰肝素酶(HPSE)表达及对其侵润侵袭能力的影响。方法:针对HPSE mRNA的不同区域设计并构建不同的shRNA表达载体,脂质体法转染HP
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目的:探讨乙酰肝素酶shRNA抑制人卵巢癌细胞系乙酰肝素酶(HPSE)表达及对其侵润侵袭能力的影响。方法:针对HPSE mRNA的不同区域设计并构建不同的shRNA表达载体,脂质体法转染HPSE高表达的人卵巢癌细胞系SKOV3,实时定量PCR检验干扰效率,选择抑制率最高的一组细胞进行抗性筛选,获得稳定转染细胞株,分别用RT-PCR和Western blot检验HPSE mRNA和蛋白表达受抑制情况,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验测定细胞增殖能力,分别采用Matrigel Invasion,Transwell Migration和Adhesion Assay方法测定细胞体外侵袭、迁移和黏附能力。结果:用荧光定量PCR对不同shRNA干扰载体的干扰效果进行检测,结果显示,pGPU6/GFP/Neo-HPSE-1222组相对拷贝数为0.936±0.417,与其他3组相比,差异有统计学意义,抑制率为48.63%。获得的该组稳定干扰表达SKOV3细胞系,经RT-PCR和Western blot检验其HPSE表达明显减少。细胞生长曲线显示干扰组细胞倍增时间延长。干扰组与对照组集落形成率分别为0.0433±0.0451和0.0397±0.00687,差异无统计学意义(P>0.05)。迁移能力实验中,干扰组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组细胞黏附能力高于对照组(P<0.05)。侵袭能力实验干扰组低于对照组(P<0.05)。结论:采用构建shRNA干扰载体对HPSE基因进行干扰,有效地抑制了HPSE基因的活性,降低了卵巢癌细胞侵袭能力,黏附能力增强。
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