南极冰藻Chlamydomonas sp．ICE—L的cDNA文库构建及品质检测

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【摘要】

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为构建南极冰藻Chlamydomonas sp．ICE-L的cDNA文库，提取对数生长期南极冰藻ICE-L的总RNA，以此为模板，通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA；再以第一链cDNA产物为模板，用LD

【作者】

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王能飞沈继红金治平赵爱云林学政

【机构】

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国家海洋局第一海洋研究所,国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室,青岛市天然产物研究开发实验室,清华大学生物系,青岛大学天然色素研究所

【出处】

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海洋科学进展

【发表日期】

：

2006年4期

【关键词】

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PCR 南极冰藻 RIBOSOMAL protein S5 CDNA文库 polymerase chain reaction （PCR） Antarctic

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目--南极冰藻抗冻蛋白的研究（40306027）,青岛市自然科学基金项目--极端环境下南极冰藻抗逆基因的研究（05-2-J056）,国家海洋局青年基金项目--南极冰藻抗逆藻种的筛选和cDNA文库构建（2006103）,中国极地科学战略研究基金--南极海冰区藻类对气温升高的适应性研究

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为构建南极冰藻Chlamydomonas sp．ICE-L的cDNA文库，提取对数生长期南极冰藻ICE-L的总RNA，以此为模板，通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA；再以第一链cDNA产物为模板，用LD-PCR合成第二链cDNA。该cDNA产物经分级分离转入大肠杆菌中，即获得南极冰藻IcBL的cDNA原始文库，其滴度为1．6×10^6 cfu／mL。扩增后的cDNA文库的滴度为1．0×10^10 cfu／mL。用PCR方法测得文库的重组率大干97％，插入cDNA

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