表达O型口蹄疫病毒衣壳蛋白的重组腺病毒构建及其免疫原性分析

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wwtrust
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
为构建表达O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)衣壳蛋白的复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体的重组腺病毒,本研究设计、合成特异性引物并扩增出FMDV-OZK93的P12A、3B3C基因,通过融合PCR方法连接2个片段,获得P12A3B3C基因后插入到pDC316-mCMV-EGFP质粒,构建了能够表达FMDV-OZK93株衣壳蛋白前体P12A和3B3C蛋白酶的重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-P12A3B3C。利用AdMaxTM腺病毒包装系统进行重组腺病毒rAdv-P12A3B3C-OZK93的包装、鉴定及扩增;并感染人胚胎肾细胞HEK-293进行表达验证。将鉴定正确且高度纯化后的重组腺病毒肌肉免疫小鼠进行免疫原性分析。结果显示,rAdvP12A3B3C-OZK93在病毒传代过程中目的基因稳定存在,且病毒滴度可达1×109.1 TCID50/mL。间接免疫荧光和Western blotting结果均表明rAdv-P12A3B3C-OZK93在HEK-293细胞中表达了FMDV特异性蛋白P12A和VP1。PK细胞感染实验证明rAdv-P12A3B3C-OZK93可感染猪源细胞,这为构建的rAdv-P12A3B3C-OZK93用于猪对抗FMDV的免疫与保护奠定了基础。相比于FMDV灭活疫苗免疫的小鼠,重组腺病毒免疫小鼠后可诱导机体产生更高水平的FMDV特异性抗体以及γ-IFN和IL-10应答反应,表明该重组腺病毒可对动物机体产生良好的免疫原性,为后续研制新型口蹄疫活载体疫苗奠定了重要基础。
其他文献
语气是古老、核心且高度复杂的语法范畴,其用法有动词语气、句子语气和意念语气三种。本研究聚焦句子语气,即小句用于体现陈述、提问、命令等基本交际功能的语法范畴。不同语气选项构成语气系统,本研究关注的是语气系统,而非单一语气类型。本研究采用系统功能类型学(SFT)的研究范式,即系统功能语言学(SFL)理论在语言类型学研究中的应用。以往对语气的类型学研究存在一些问题,如,多考察单一语气的结构特征,缺乏系统
目的:探讨18F-FDG PET/CT定量指标及纹理参数预测利妥昔单抗联合一线化疗(R-CHOP)方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中期疗效及预后的价值。方法:分析化疗前、化疗3~4周期后行PET/CT检查的DLBCL患者的PET/CT图像和临床资料,测量基线PET/CT参数并分析基于PET图像提取的12个基于直方图的一阶纹理特征。(1)比较化疗中期完全缓解(CR)组和非完全缓解(Non-C
背景:终末期肝病现已成为重要全球疾病负担之一,肝脏移植是目前改善终末期肝病预后最有效的方法。但由于供肝的极大短缺,仅有少部分患者能够成功接受肝移植。优化供肝保护策略、提高供肝质量、扩大边缘供肝使用率是目前缓解器官短缺的重要方法。低温机械灌注(HMP)是近年来器官保存方法的热点之一,研究表明HMP对供肝保存效果优于传统的静态冷保存(SCS)。优化HMP方法包括对灌注器械的条件优化,如灌注压力、流速等
研究背景妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠期首次发现的糖代谢异常,并不是明确存在的1型或2型糖尿病。GDM是妊娠期常见的代谢性疾病之一,在世界范围内均有分布且发生率逐年快速增长[1]。GDM控制不好会对母儿引起严重的近期和远期并发症[2]。GDM患者可能并发包括妊娠期羊水过多、高血压疾病和感染,且日后患2型糖尿病[3]、心血管疾病[4]和女性恶
【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)E0和E2串联基因重组腺病毒作为基因工程疫苗的应用潜力。【方法】采用PCR扩增、E0-E2基因融合并构建重组穿梭质粒pDC316-E0-E2,将其与AdMax腺病毒系统的骨架质粒共转染HEK293T细胞包装成重组腺病毒,通过Western blotting进行验证,并通过Reed-Muench法测定病
2021年,新冠疫情延宕反复和大国战略竞争加剧,为中国经济外交带来诸多挑战。虽然全球经济开始有所复苏,但全球高通胀等问题对于经济复苏的干扰仍不容小觑。新上任的拜登政府加大对华战略竞争力度,重新回归多边主义,并在技术、价值观、基建等领域全面构建排华联盟,由此掀起新一轮国际制度竞争热潮。在此背景下,中国参与国际经济协定的进展喜忧参半。在RCEP终于达到生效门槛,中国也积极申请加入CPTPP和DEPA的
目的:探讨线上性客体化经历对女大学生外表焦虑的影响机制。方法:以566名女大学生为被试,采用线上性客体化经历量表、社交网站体像比较量表、身体监视量表及外表焦虑量表进行测试。结果:女大学生线上性客体化经历、社交网站体像比较、自我客体化及外表焦虑彼此之间均呈正相关;体像比较在线上性客体化经历与女大学生外表焦虑之间起中介作用;女大学生自我客体化可以调节线上性客体化经历和外表焦虑的关系,体像比较的中介作用
新辅助化疗(Neoadjuvant chemotherapy,NCT)是针对局部晚期乳腺癌患者的标准治疗。目前的影像学评估在全面性和时效性上存在一定的缺陷。液体活检技术因其无创、实时、全面等特性广泛应用于乳腺癌患者的全程管理,但在乳腺癌新辅助化疗疗效评估中的作用尚待明确。本研究共分为三个部分,分别探讨了循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)、非整倍体循环内皮细胞(ci