【摘 要】
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目的 构建TIMP-1小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并观察其对肝星状细胞株TIMP-1 mRNA表达的作用.方法 根据siRNA设计原则,在TIMP-1 mRNA序列中选择2个特异性靶序列(447～465 nt、
【机 构】
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河南中医学院第三附属医院,郑州大学第一附属医院消化内科,郑州大学医学院微生物免疫教研室,河南省肿瘤病理重点实验室,郑州大学第一附属医院外科
【基金项目】
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河南省高校杰出科研创新人才工程项目
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目的 构建TIMP-1小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并观察其对肝星状细胞株TIMP-1 mRNA表达的作用.方法 根据siRNA设计原则,在TIMP-1 mRNA序列中选择2个特异性靶序列(447～465 nt、552～540 nt)及1条无关对照序列;体外合成对应发卡样DNA片段,将其克隆入pGEM T连接载体,BamH I和Xho I分别双酶切pGEM-T及表达载体pRNAT-U6.2,胶回收粘末端将特异序列定向亚克隆构建TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,用脂质体包裹转染入T6细胞,采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA表达水平的变化.结果 所构建的TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,经酶切鉴定与测序,结果显示特定位点靶序列与设计序列完全一致;转染T6细胞后,TIMP-1 mRNA表达明显降低.结论 成功构建TIMP-1 siRNA载体TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA,转染T6细胞可以有效抑制TIMP-1 mRNA的表达.
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