【摘 要】
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目的通过获得纯化有活性功能的GST-HDAC6融合蛋白,为去乙酰化酶调控肿瘤的发生发展机制提供实验基础。方法采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白去乙酰化酶HDAC6全长编码
【机 构】
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解放军总医院普通外科,解放军总医院普通外科研究所,解放军总医院肿瘤内科
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81773135,81572465).
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目的通过获得纯化有活性功能的GST-HDAC6融合蛋白,为去乙酰化酶调控肿瘤的发生发展机制提供实验基础。方法采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白去乙酰化酶HDAC6全长编码区基因序列,将其正确插入到pGEXKG载体中,重组质粒在大肠埃希菌DH5α中转化表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和株对融合蛋白进行纯化,以SDSPAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物,最后通过去乙酰化实验检测融合蛋白的生物活性。结果从人乳腺文库中扩增获得约3645bp的DNA片段,并成功克隆至pGEX-
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