【摘 要】
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目的构建BimS真核质粒过表达载体及鉴定并转染ACC-2细胞,观察其在细胞中上调BimS蛋白表达及促凋亡作用。方法根据人BimS基因设计引物,扩增目的基因片段,挑选阳性克隆,分别采
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目的构建BimS真核质粒过表达载体及鉴定并转染ACC-2细胞,观察其在细胞中上调BimS蛋白表达及促凋亡作用。方法根据人BimS基因设计引物,扩增目的基因片段,挑选阳性克隆,分别采用PCR扩增电泳和DNA测序鉴定。分为对照组和实验组将构建的质粒表达载体转染ACC-2细胞,通过定量PCR和Western biot检测其基因和蛋白相对表达水平,检测细胞凋亡率和超微结构的变化。结果实验组细胞凋亡明显,凋亡率为(29.6±0.3)%;对照组细胞凋亡率仅为(0.83±0.2)%,实验组与对照组细胞凋亡率比较具有统计学差异(P<0.05)。电镜下实验组细胞呈典型的细胞凋亡形态学改变,对照组细胞形态未发生变化。结论 BimS真核质粒过表达载体构建成功,并能显著上调ACC-2细胞中BimS mRNA、蛋白表达及诱导细胞凋亡。
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