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关键词 小儿清咽冲剂 牛蒡苷 高效液相色谱法
资料与方法
仪器与试药:① 仪器:2010AHT高效液相色谱仪,Class-vp工作站, UV-260紫外分光光度计, LC-250超声清洗机(250W 50kHz)。② 试药:牛蒡苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:110819-200404供含量测定用)。乙腈为色谱纯,水为纯化水,小儿清咽冲剂及阴性样品由吉林省吉特药业有限公司提供(样品批号:050101,050102,050103,050104,050105)。
实验方法:①色谱条件:色谱柱:Agilent Extend ODS C18(250mm×4.6 mm, 5μm);流动相:乙腈-水(23:77);流速: 1.0ml/min;检测波长: 280nm;进样量:20μl。理论板数按牛蒡苷峰计算应不底于2000。②对照品溶液的制备:取牛蒡苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 1ml含0.1mg的溶液,即得。③ 供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品,研细,取5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250w,频率50kHz)20分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。④ 阴性对照溶液的制备:取缺牛蒡子的阴性样品适量,按供试品溶液的制备方法提取阴性对照溶液。
结 果
干扰试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定,结果显示样品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间(tR=26.550分钟)的色谱峰,而阴性对照溶液在此保留时间无此峰,说明小儿清咽冲剂的其他成分对牛蒡苷的测定无干扰。证明本法可行。
线性关系考察:精密吸取对照品储备液(每1ml含0.5mg)各0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件进行测定,以峰面积A对对照品浓度C作线性回归。得回归方程为:Y=11008C+1692.4, r=0.9999。结果表明,牛蒡苷在25~250μg/ml范围内呈良好的线性关系。
精密度试验:称取样品(批号:050101)1份,按供试品溶液的制备方法,依上述色谱条件,依法进行测定,连续重复进样6次,测得牛蒡苷峰面积平均值为934361,其RSD为0.5%(n=6)。
重复性试验:平行称取同一样品(批号:050101)6份,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定,并计算含量,结果牛蒡苷平均含量为5.10 mg/袋,RSD=0.7%(n=6)。
稳定性试验 :称取样品(批号:050101)1份,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定,每隔4小时进样1次,测得峰面积平均值为934020,其RSD為1.3%(n=6),表明样品溶液在24小时内稳定。
回收率试验 :采用加样回收试验,精密称取已知含量的样品(批号:050101)细粉6份(各份约2.5g),精密加入牛蒡苷对照品溶液(0.5944mg/ml)4ml,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行,测定牛蒡苷的含量,并计算回收率,测定结果见表1。
样品测定:取5个批号的样品,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定,每批号测定5次,测定结果见表2。
讨 论
检测波长的选择:我们取牛蒡苷对照品的甲醇溶液,经岛津UV-260型可见-紫外分光光度计,在200~300nm范围内扫描,在279nm和228nm处有最大吸收峰。并参考牛蒡子中牛蒡苷 的测定波长,故选择其测定波长为280nm。
流动相的选择:选用乙腈-水(23∶77)作为流动相,牛蒡苷对照品峰形良好,保留时间适宜,理论板数为8669。样品中牛蒡苷与其它组分均能达到基线分离,分离度大于1.5。
提取溶剂的选择:我们曾分别采用了以50%甲醇,甲醇为溶剂。进行样品提取溶剂的比较,实验结果证明,在其他条件完全相同的条件下,两种溶剂无明显差别,但用50%甲醇提取能把样品中的糖溶解,使样品难以过滤,所以,我们选择了以甲醇为溶剂。
提取方法的选择:我们采用超声10分钟,20分钟,30分钟,三个时段的比较,结果超声20分钟好于10分钟,但超声30分钟与超声20分钟无明显差异。故我们采用以甲醇为溶剂超声处理20分钟的提取方法。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药品标准. 中药成方制剂. 第6册,1989:23
2 中国药典.一部,2005:48
资料与方法
仪器与试药:① 仪器:2010AHT高效液相色谱仪,Class-vp工作站, UV-260紫外分光光度计, LC-250超声清洗机(250W 50kHz)。② 试药:牛蒡苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:110819-200404供含量测定用)。乙腈为色谱纯,水为纯化水,小儿清咽冲剂及阴性样品由吉林省吉特药业有限公司提供(样品批号:050101,050102,050103,050104,050105)。
实验方法:①色谱条件:色谱柱:Agilent Extend ODS C18(250mm×4.6 mm, 5μm);流动相:乙腈-水(23:77);流速: 1.0ml/min;检测波长: 280nm;进样量:20μl。理论板数按牛蒡苷峰计算应不底于2000。②对照品溶液的制备:取牛蒡苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 1ml含0.1mg的溶液,即得。③ 供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品,研细,取5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率250w,频率50kHz)20分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。④ 阴性对照溶液的制备:取缺牛蒡子的阴性样品适量,按供试品溶液的制备方法提取阴性对照溶液。
结 果
干扰试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定,结果显示样品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间(tR=26.550分钟)的色谱峰,而阴性对照溶液在此保留时间无此峰,说明小儿清咽冲剂的其他成分对牛蒡苷的测定无干扰。证明本法可行。
线性关系考察:精密吸取对照品储备液(每1ml含0.5mg)各0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件进行测定,以峰面积A对对照品浓度C作线性回归。得回归方程为:Y=11008C+1692.4, r=0.9999。结果表明,牛蒡苷在25~250μg/ml范围内呈良好的线性关系。
精密度试验:称取样品(批号:050101)1份,按供试品溶液的制备方法,依上述色谱条件,依法进行测定,连续重复进样6次,测得牛蒡苷峰面积平均值为934361,其RSD为0.5%(n=6)。
重复性试验:平行称取同一样品(批号:050101)6份,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定,并计算含量,结果牛蒡苷平均含量为5.10 mg/袋,RSD=0.7%(n=6)。
稳定性试验 :称取样品(批号:050101)1份,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定,每隔4小时进样1次,测得峰面积平均值为934020,其RSD為1.3%(n=6),表明样品溶液在24小时内稳定。
回收率试验 :采用加样回收试验,精密称取已知含量的样品(批号:050101)细粉6份(各份约2.5g),精密加入牛蒡苷对照品溶液(0.5944mg/ml)4ml,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行,测定牛蒡苷的含量,并计算回收率,测定结果见表1。
样品测定:取5个批号的样品,按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定,每批号测定5次,测定结果见表2。
讨 论
检测波长的选择:我们取牛蒡苷对照品的甲醇溶液,经岛津UV-260型可见-紫外分光光度计,在200~300nm范围内扫描,在279nm和228nm处有最大吸收峰。并参考牛蒡子中牛蒡苷 的测定波长,故选择其测定波长为280nm。
流动相的选择:选用乙腈-水(23∶77)作为流动相,牛蒡苷对照品峰形良好,保留时间适宜,理论板数为8669。样品中牛蒡苷与其它组分均能达到基线分离,分离度大于1.5。
提取溶剂的选择:我们曾分别采用了以50%甲醇,甲醇为溶剂。进行样品提取溶剂的比较,实验结果证明,在其他条件完全相同的条件下,两种溶剂无明显差别,但用50%甲醇提取能把样品中的糖溶解,使样品难以过滤,所以,我们选择了以甲醇为溶剂。
提取方法的选择:我们采用超声10分钟,20分钟,30分钟,三个时段的比较,结果超声20分钟好于10分钟,但超声30分钟与超声20分钟无明显差异。故我们采用以甲醇为溶剂超声处理20分钟的提取方法。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部药品标准. 中药成方制剂. 第6册,1989:23
2 中国药典.一部,2005:48