【摘 要】
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目的验证没食子酸(GA)对线粒体氧化应激损伤过程中的线粒体保护作用。方法分别采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和小鼠肝缺血再灌注(I/R)损伤构建离体和在体线粒体氧化应激损伤模型;
【机 构】
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江苏大学药学院线粒体与神经生物学试验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81503051),中国博士后科学基金资助项目(2017M621488),江苏大学青年骨干教师培育计划,江苏大学高级专业人才科研启动基金项目(13JDG063)
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目的验证没食子酸(GA)对线粒体氧化应激损伤过程中的线粒体保护作用。方法分别采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和小鼠肝缺血再灌注(I/R)损伤构建离体和在体线粒体氧化应激损伤模型;使用MTT、JC-1和MitoSOX Red法分别对离体细胞活力、线粒体膜电位(MMP)和线粒体活性氧(ROS)水平进行检测;使用比色法、HE染色、Western印迹法、MitoSOX Red法分别对血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平、肝组织坏死程度、细胞色素C(Cyto C)线粒体凋亡相关蛋白表达、离体肝线粒体ROS水平进行检测。结果人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)线粒体氧化应激损伤模型实验结果显示,与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),JC-1探针红绿荧光比值显著降低(P<0.01),MitoSOX Red荧光强度明显增强(P<0.01);与模型组相比,预先给予GA 10μmol/L的细胞存活率明显增加(P<0.01),JC-1探针红绿荧光比值显著升高(P<0.01),MitoSOX Red荧光强度明显减弱(P<0.01)。小鼠肝I/R模型实验结果显示,与对照组比较,模型组小鼠血清中ALT及AST水平显著升高(P<0.01),肝中Caspase-9活化水平显著增强(P<0.01),胞浆蛋白中Cyto C表达显著增加,线粒体中Cyto C表达显著减少,线粒体ROS的生成表达显著增加(P<0.01);与模型组相比,GA 100 mg/kg组小鼠血清中ALT及AST水平显著降低(P<0.01),肝中Caspase-9活化水平显著降低(P<0.01),胞浆蛋白中Cyto C表达显著减少(P<0.01),线粒体中Cyto C表达显著增加(P<0.01),线粒体ROS的生成显著减少(P<0.01)。结论作为一种新型线粒体功能调节剂,GA对线粒体氧化应激损伤具有显著改善作用。
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