【摘 要】
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目的构建携带色素上皮衍生因子（PEDF）基因的慢病毒（LV）载体并转染人脐带间充质干细胞（hUCMSCs），初步探讨基因修饰PEDF-间充质干细胞的可行性。方法采用基因重组方法构建LVPEDF载体，测定其LV滴度，以感染复数（MOI）值为10、30、50的LV体外转染hUCMSCs，并据此分为相应MOI值实验组；以不含PEDF基因的相同MOI值的重组LV载体[LV-绿色荧光蛋白（GFP）]转染hU
【机 构】
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300020 天津市眼科医院 天津医科大学眼科临床学院 天津眼科学与视觉科学重点实验室天津市眼科研究所,300020 天津市眼科医院 天津医科大学眼科临床学院 天津眼科学与视觉科学重点实验室天津市眼科
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目的构建携带色素上皮衍生因子（PEDF）基因的慢病毒（LV）载体并转染人脐带间充质干细胞（hUCMSCs），初步探讨基因修饰PEDF-间充质干细胞的可行性。
方法采用基因重组方法构建LVPEDF载体，测定其LV滴度，以感染复数（MOI）值为10、30、50的LV体外转染hUCMSCs，并据此分为相应MOI值实验组；以不含PEDF基因的相同MOI值的重组LV载体[LV-绿色荧光蛋白（GFP）]转染hUCMSCs，并据此分为相应MOI值对照组。荧光显微镜观察两组细胞转染效率并计算转染率。采用细胞免疫荧光法、免疫细胞化学法、实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。
结果经酶切以及基因测序鉴定证明LV载体构建成功。转染96 h后，50MOI实验组细胞可见大量GFP表达，转染效率为72.1%。荧光显微镜观察发现，转染后96 h，50MOI实验组细胞胞浆PEDF、VEGF表达增强。光学显微镜观察发现，转染后96 h，50MOI实验组细胞胞浆PEDF表达较低，而VEGF表达较强。RT-PCR检测结果发现，50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF mRNA相对表达量分别为0.170±0.028、0.015±0.007；VEGF mRNA相对表达量分别为0.265±0.022、0.285±0.049。两组细胞中PEDF mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（F=70.29，P<0.001）；VEGF mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（F=9.57，P>0.05 ）。
结论成功构建携带PEDF基因LV表达载体，并在hUCMSCs中过表达PEDF基因。
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