【摘 要】
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采用抑制差减杂交技术(SSH)对禽致病性大肠杆菌(APEC)高致病株E037(血清型078)与非致病菌株K-12 MG1655进行基因组差异片段克隆与分析.从E037株中共检出17个特异性差异片段,
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院,扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
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采用抑制差减杂交技术(SSH)对禽致病性大肠杆菌(APEC)高致病株E037(血清型078)与非致病菌株K-12 MG1655进行基因组差异片段克隆与分析.从E037株中共检出17个特异性差异片段,选取其中的编号为88#的基因进行突变株的构建.通过PCR扩增出88#的目的基因片段,并插入到T-easy载体的多克隆位点中,随之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-88#,将突变载体转化到受体APEC E037中,根据同源重组原理,筛选出E03788#基因插入突变株E037-1.对21日龄白来航SPF鸡右胸气囊分别接种E037、E037-1株0.1mL (108 cfu/mL),在6,24和48 h分别扑杀SPF鸡,无菌采集血液、心脏、肝、脾、左肺、肾进行细菌学检查,同时进行病变观察.结果显示:接种鸡6h后,E037-1在肝、脾和肺中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P＜0.01);接种鸡24 h后,E037-1在心脏、肝、脾和肺中的细菌数与E037比较有所降低,差异显著(P＜0.05);接种鸡48 h后,E037-1在心、肝中的细菌数比E037明显降低,差异极显著(P＜0.01),说明E037-1突变株的致病性明显下降.结果显示88#基因可能是APEC的致病相关基因,其功能值得进一步研究.
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