【摘 要】
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目的 研究大鼠血栓调节蛋白基因的扩增、克隆及在原核细胞中的表达.方法 以大鼠基因组DNA为模板,进行PCR扩增,用pMD18-T simple vector进行T克隆并测序.经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双
【机 构】
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中国医科大学,Department of Chemistry
【基金项目】
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辽宁百千万人才工程培养经费资助项目
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目的 研究大鼠血栓调节蛋白基因的扩增、克隆及在原核细胞中的表达.方法 以大鼠基因组DNA为模板,进行PCR扩增,用pMD18-T simple vector进行T克隆并测序.经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切,将目的 基因克隆到pET-28a(+)表达载体质粒中,转化E.coli BL21(DE3)表达重组蛋白,通过SDS-PAGE分析表达产物.结果 含有大鼠血栓调节蛋白基因的PCR产物约为1 850 bp.重组pMD18-T simple vector质粒和重组pET-28a(+)质粒经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后,有相应大小的目的 片段,测序结果正确.经IPTG诱导,重组pET-28a(+)质粒在E.coli B[21(DE3)中有相对分子质量约为72 000的融合蛋白表达.结论 成功克隆了大鼠血栓调节蛋白基因,并成功表达了该基因编码的蛋白.
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