【摘 要】
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目的建立大鼠睾丸间质细胞体外分离、纯化和培养的方法,探讨不同浓度和时间硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞的毒作用。方法采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法
【机 构】
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兰州大学公共卫生学院卫生毒理学研究所;
【基金项目】
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国家大学生创新性实验计划项目(091073052)
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目的建立大鼠睾丸间质细胞体外分离、纯化和培养的方法,探讨不同浓度和时间硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞的毒作用。方法采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、纯化睾丸间质细胞,并采用3β-HSD染色法进行纯度鉴定。硫酸镍(NiSO4)0、62.5、125、250、500和1 000μmol/L对分离纯化的睾丸间质细胞染毒,采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)渗漏法观察染毒3、6、12、24、36和48 h后,睾丸间质细胞增殖和培养上清液中LDH活力的变化。结果 (1)纯化的睾丸间质细胞经3β-HSD特异性染色鉴定,纯度可达到95%以上。(2)相同时间NiSO4各浓度组与对照组比较:染毒12 h后,NiSO4各浓度组均出现间质细胞增殖抑制(P<0.01);染毒6 h后,NiSO4各浓度组培养液中LDH活力均开始升高(P<0.05或P<0.01)。(3)相同浓度各染毒时间与对照组(0 h)比较:NiSO4 250μmol/L及其以上浓度组,各染毒时间均可抑制间质细胞增殖(P<0.01)。除NiSO4 62.5μmol/L染毒3 h组外,其他各浓度不同染毒时间LDH活力均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论建立了较理想的体外分离、纯化和培养睾丸间质细胞的方法;镍对体外培养的睾丸间质细胞具有明显的毒作用,并呈现一定的剂量-效应和时间-效应关系。
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