【摘 要】
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目的研究体外培养杀伤细胞(Cytokine-induced killer cell,DC-CIK)杀伤白血病细胞的效应机制,为研究白血病的免疫疗法提供一定的试验依据。方法收集健康成年人外周血,通过淋
【机 构】
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泸州医学院第一附属医院血液内科; 成都军区总医院血液内科;
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目的研究体外培养杀伤细胞(Cytokine-induced killer cell,DC-CIK)杀伤白血病细胞的效应机制,为研究白血病的免疫疗法提供一定的试验依据。方法收集健康成年人外周血,通过淋巴细胞分离液分离获得人单个核细胞(PBMNC),经过诱导培养获得DC和CIK,通过流式细胞仪检测DC和CIK的细胞表面抗原,共培养成DC-CIK细胞。MTT法绘制DC-CIK细胞生长曲线。K562/A02,THP-1及HL-60细胞作为靶细胞,分别以DC、CIK、DC-CIK细胞作为效应细胞,并通过MTT比色法检测细胞的杀伤效应。用ELISA分别检测DC、CIK、DC-CIK细胞上清中,IL-12、IL-17、INF-α及IFN-γ的表达量,并检测细胞表面抗原。进一步通过Real-time PCR分别分析K562/A02及与DCCIK共培养后K562/A02细胞中多药耐药基因1(MDR1)的表达差异。结果从外周血中可以分离获得较纯的DC及CIK细胞,通过共培养获得DC-CIK细胞。K562/A02,THP-1及HL-60细胞作为靶细胞,分别以DC、CIK、DC-CIK细胞作为效应细胞,随着效靶比的升高,杀伤活性逐渐上升,且DC-CIK组的杀伤活性在同效靶比组中最强(P<0.01)。当K562/A02与DC-CIK细胞共培养后,其MDR1基因的表达量显著降低(P<0.01)。结论体外培养DCCIK细胞可以显著提高抗K562/A02细胞活性,主要作用机理包括显著增强IL-17等免疫因子的表达以及降低MDR1的表达。
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