【摘 要】
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由于用大肠杆菌对植物乳杆菌来源的bsh基因进行胞内和胞外表达时,它们很容易形成包涵体,而且大肠杆菌的内毒素会显限制BSH的应用,所以利用毕赤酵母这一高效的表达系统对其进
【机 构】
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江南大学生物工程学院; 江南大学工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室; 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31100064);“863”项目(2011AA100905);教育部长江学者和创新团队发展计划(IRT1135);江苏省自然科学基金面上项目(BK2012553);江苏省优势学科项目;中央高校基本科研业务费专项资金(JUDCF10045)资助~~
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由于用大肠杆菌对植物乳杆菌来源的bsh基因进行胞内和胞外表达时,它们很容易形成包涵体,而且大肠杆菌的内毒素会显限制BSH的应用,所以利用毕赤酵母这一高效的表达系统对其进行了分泌表达.首先用融合PCR的方法将信号肽α-factor与BSH连接,然后再克隆到质粒pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-α-factor-BSH.重组质粒经过SalⅠ线性化后转化至毕赤酵母GS115.表达产物经SDS-PAGE分析和酶活测定发现,重组BSH的相对分子质量(Mr)和胞外酶活分别为37.0×103和1.08 U mL-1.通过正交实验[L9(34)]对发酵条件优化后,胞外总酶活达到2.69 U mL-1,比原来提高了1.49倍.研究为胆盐水解酶的分离纯化、酶学性质研究以及大规模生产奠定了一定的基础.
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