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为建立能够应用于大肠杆菌基因无痕敲除的方法，本研究分别从大肠杆菌TG1基因组和pKD13质粒中扩增出链霉素敏感基因（str^S，即rpsL基因）和卡那抗性基因（kan^R），采用重叠延伸PCR方法将str^S基因和kan^R基因拼接，并将拼接片段分别克隆于pMD18-T和pBAD33载体中，再以重组载体为模板，以带有flgK基因同源臂的引物扩增获得Placstr^S-kan^R打靶片段和Parastr^S-kan^R打靶片段，然后结合Red重组技术构建了相应的flgK基因敲除菌株placSK-ΔflgK/