【摘 要】
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为了构建四环素(tetracycline,Tet)诱导的利用Tet-on诱导表达系统调控的Vero-TR母细胞,建立Tet诱导表达或沉默DEC1的Vero细胞系并加以鉴定。试验将表达Tet阻遏蛋白(Tet repre
【基金项目】
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国家自然基金面上项目(31472218);江苏省自然科学青年基金项目(BK20140711);中央高校基本业务费(Y0201300526;Y0201300527);江苏省优势学科专项经费
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为了构建四环素(tetracycline,Tet)诱导的利用Tet-on诱导表达系统调控的Vero-TR母细胞,建立Tet诱导表达或沉默DEC1的Vero细胞系并加以鉴定。试验将表达Tet阻遏蛋白(Tet repressor protein,TetR)的pc DNA6转染至Vero细胞,通过Blasticidin筛选稳定表达TetR的阳性细胞克隆,即Vero-TetR母细胞系。将克隆有DEC1基因(CDS区的pc DNA4真核表达载体或克隆有特异性靶向DEC1基因的shRNA的p Babe-H1真核表达载体,分别转染至Vero-TR细胞,通过Zeocin或Puromycin筛选诱导表达或沉默DEC1的阳性细胞克隆,命名为Vero-DEC1和VerosiDEC1。利用Western blot检测Vero细胞中Tet诱导表达或沉默DEC1的效果。最后成功构建了Vero-TR、Vero-DEC1和Vero-siDEC1的稳定细胞系,Western blot结果显示DEC1能够在Tet的调控下有效表达或沉默。Vero-TR母细胞系的成功构建为建立其他宿主细胞基因表达或沉默的细胞系提供了重要材料,Vero-DEC1和Vero-siDEC1细胞系的成功构建为研究DEC1在正常或感染等应激情况下的生物学功能奠定了基础。
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