【摘 要】
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目的:探讨转染微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对c-Kit~+心脏干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法:采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养c-Kit~+心脏干细胞,以Lipofectamine~
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No.81760041）, 贵州省科技项目（黔科合LH字[2017]7107号）
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目的:探讨转染微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对c-Kit~+心脏干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法:采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养c-Kit~+心脏干细胞,以Lipofectamine~2000为载体将miR-21模拟物(mimics)和其阴性对照(mimics negative control,MNC)分别转染至c-Kit~+心脏干细胞。实验分为正常对照(control)组(正常培养的心脏干细胞)、MNC组(转染MNC 48 h的细胞)和mimics组(转染miR-21 mimics 48 h的细胞)。qPCR检测各组细胞miR-21的表达情况,以CCK-8法和EdU法检测细胞增殖状态,qPCR及免疫荧光检测细胞分化情况,划痕实验观察细胞迁移能力。结果:成功获取c-Kit~+心脏干细胞,经流式细胞术鉴定其高表达c-Kit(90.8%),低表达CD45(0.6%)及CD34(0.5%);与control组相比,mimics组中miR-21表达量显著增高(P<0.05),MNC组中miR-21表达量与control组无明显差异。CCK-8和EdU实验结果发现与control组比较,mimics组中细胞增殖能力明显增加(P<0.05),MNC组中细胞增殖能力无明显变化;免疫荧光及qPCR结果表明3组心肌细胞谱系标志物Nkx2.5、CD31和α-平滑肌肌动蛋白水平无明显差异;细胞划痕实验结果发现,3组间细胞迁移能力无明显不同。结论:过表达miR-21可显著促进c-Kit~+心脏干细胞的增殖能力,但对细胞迁移及分化能力无明显影响。
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