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摘要[目的]探索软枣猕猴桃“寒玉1号”适宜组培方法。[方法]以新生腋芽为外植体，筛选最佳消毒方法，并对影响其生长的NAA、6-BA 等生长调节物质的浓度进行筛选。[结果]以5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min为适宜消毒方法，污染率和褐化率均较低；腋芽在WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基中增殖效果最佳，增殖系数可达5.6，株高3.9 cm；丛生芽在WPM+NAA 0.3 mg/L培养基中诱导生根效果最佳，生根率可达100%，平均根条数为4.4条，平均根长为5.2 cm。[结论]软枣猕猴桃“寒玉1号”可采用组织培养的方法进行快速繁殖。
关键词软枣猕猴桃；“寒玉1号”；腋芽；组织培养
中图分类号S663.4文献标识码A文章编号0517-6611（2017）22-0098-03
Abstract [Objective] To explore the suitable tissue culture technique for Actinidia arguta “Hanyu No.1”. [Method] With axillary bud as explant， the best disinfection method was filtered， and the NAA， 6BA concentration were selected. [Result] The best disinfection methods were 5% NaClO 8 min+0.1%HgCl2 6 min or 9 min， 5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 6 min， in which the mortality rate and contamination rate were lower. The best medium of inducing germinating of explant was WPM+6BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L， in which the ratio of proliferation was 5.6 and the height of plant was 3.9 cm. The best medium of inducing rooting from cluster buds was WPM+NAA 0.3 mg/L， in which the rate of rooting was 100%， the average number of root was 4.4 and the average length of root was 5.2 cm. [Conclusion] It concluded that Actinidia arguta “Hanyu No.1” can adopt the method of tissue culture for rapid propagation.
Key wordsActinidia arguta；“Hanyu No.1”；Axillary bud；Tissue culture
軟枣猕猴桃（Actinidia arguta），属于猕猴桃科猕猴桃属，是多年生藤本落叶植物，别名软枣子、猕猴桃、猕猴梨、中华软枣猕猴桃等。软枣猕猴桃果实可食用，富含多种营养成分，具有很高的营养和经济价值[1]，可加工成果脯、罐头、果汁、果醬，也可以用来制作糕点或酿酒等[2]。软枣猕猴桃还可药用，具有健胃、解热、止血等功能，其根及根皮对消化道癌症具有一定的抑制和治疗作用[3]。软枣猕猴桃属于雌雄异株植物，以野生为主，果实的产量和质量不高。自20世纪90年代开始驯化人工栽培，多采用种子播种、枝条扦插等方式进行常规繁殖。种子繁殖存在无法辨别雌雄植株的缺点，扦插等繁殖方法存在繁殖系数低等缺点，很难满足市场的需求[4-5]。为了快速获得大量可结果雌株，对其组培技术进行研究，通过筛选最佳消毒方法和植物生长调节物质使用浓度，建立高效快速繁殖体系，以期为软枣猕猴桃的大面积推广栽培提供支持。
1材料与方法
1.1材料
试验材料为软枣猕猴桃“寒玉1号”枝条，实验室内水培促使其腋芽萌发，取新生3～5 cm腋芽进行试验。
1.2方法
1.2.1腋芽消毒方法。
将腋芽剪切成2 cm长的小段置于无菌瓶内，用5% NaClO和0.1% HgCl2浸泡消毒，消毒时间如下：X1（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 3 min），X2（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min），X3（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 9 min），X4（5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 3 min），X5（5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min），X6（ 5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 9 min）。NaClO和HgCl2浸泡消毒后再用无菌水冲洗3次，最后放入带有滤纸的无菌培养皿上备用。
1.2.2腋芽增殖培养。
将消毒后的腋芽接种到增殖培养基中，培养基配方如下：Y1（WPM+6-BA 2.0 mg/L），Y2（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y3（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y4（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y5（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y6（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y7（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y8（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y9（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y10（WPM+6-BA 4.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L）。每瓶培养基接种5个腋芽，每个处理接种5瓶，重复3次。统计腋芽增殖系数（增殖系数=再生丛生芽总数/接种腋芽总数）、平均株高等。 1.2.3生根培养。
将组培增殖形成的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养，培养基配方如下：G1（WPM+NAA 0.1 mg/L），G2（WPM+NAA 0.2 mg/L），G3（WPM+NAA 0.3 mg/L），G4（WPM+NAA 0.4 mg/L），G5（WPM+IBA 0.1 mg/L），G6（WPM+IBA 0.2 mg/L），G7（WPM+IBA 0.3 mg/L），G8（WPM+IBA 0.4 mg/L）。每瓶培养基接种5个丛生芽苗，每个处理接种5瓶，重复3次。每天定期观察统计其生根时间，20 d后计算生根率（生根率=生根苗数/接种苗数）、每株苗生根数、根长等指标。
1.2.4培养条件。
培养温度为（21±2）℃，空气相对湿度 40%～50%，光照时间 12 h/d，光强为1 500～2 000 lx[6]。
1.3数据处理与分析
用Excel 2003对数据进行计算，用SPSS16.0软件进行统计分析。
2结果与分析
2.1不同处理外植体生长情况
接种7 d后，对不同消毒方法外植体的污染率和褐化率进行统计，结果见表1。由表1可知，X3和X6处理外植体污染率较低，二者间差异不显著。X1处理污染率最高，达33.3%。X6处理外植体褐化率最高，为30.7%。X1 、X2和X4处理外植体褐化率较低，3个处理间差异不显著。固定NaClO消毒时间，随着HgCl2 消毒时间的延长，污染率会逐渐降低，褐化率会逐渐增高。固定HgCl2 消毒时间，随着NaClO消毒时间的延长，在污染率方面，除X1和X4 处理差异显著外，其他处理变化不显著；在褐化率方面，除X1和X4 处理差异不显著外，其他处理差异显著。这说明NaClO和HgCl2对外植体的消毒及褐化均产生了一定的作用。综合考虑，X2 、X3和X5处理在软枣猕猴桃“寒玉1号”外植体消毒方面为较适宜的方法。
2.2不同处理腋芽增殖情况
腋芽接种30 d后，调查其增殖情况，结果见表2。腋芽接种及增殖生长情况见图1a、b。
由表2可知，10种不同的培养基均能诱导外植体增殖，Y6处理的腋芽增殖系数最高，为5.6；增殖苗株高最高，为3.9 cm，均显著高于其他处理。这说明在诱导腋芽增殖上Y6处理为
适宜的培养基配方。固定6-BA浓度，随着NAA浓度的增大，增殖系数出现先增后降的现象。当6-BA浓度为2.0和3.0 mg/L时，随着NAA浓度的增大，株高出现先增后降的现象；当6-BA浓度为4.0 mg/L时，随着NAA浓度的增大，株高出现下降的现象。固定NAA浓度，随着6-BA浓度的增大，增殖系数和株高均出现先增后降的现象。
2.3不同处理组培苗生根情况
接种后20 d，调查组培苗生根情况，结果见表3和图1c。由表3可知，丛生芽苗在附加不同浓度IBA和NAA的培养基上均能生根。G3、G4、G7处理的生根率均为100%，显著高于其他处理。G3处理的生根时间最短，为5 d。G3处理的根数和根长表现最好，根数为4.4条，根长为5.2 cm，均显著高于其他处理。在提高生根时间和生根率方面，适宜浓度的IBA和NAA均能达到良好的效果，但在促进根数及根长方面NAA效果优于IBA。综合各因素考虑，G3处理为促进软枣猕猴桃“寒玉1号”组培苗生根的适宜培养基配方。
3结论与讨论
通过对6种不同消毒方法进行比较发现，不同消毒剂的处理时间对软枣猕猴桃外植体的消毒效果有较大影响，5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min这3个处理为外植体适宜消毒方法；在增殖培養过程中，WPM+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L为腋芽增殖最佳培养基，低浓度的NAA对丛生芽的诱导有促进作用，浓度过高会对诱导有抑制作用；在生根培养过程中，WPM+NAA 0.3 mg/L为最佳生根培养基，在提高生根时间和生根率方面，適宜浓度的IBA和NAA均能达到良好的效果，但在促进根数及根长方面NAA效果优于IBA。
目前，国内外已有许多软枣猕猴桃优良品种的人工繁殖及栽培获得成功。我国具有丰富的野生软枣猕猴桃品种资源，但这些品种人工繁殖并开发利用的极少。软枣猕猴桃的开发利用研究还需要进一步的努力。该研究建立了软枣猕猴桃“寒玉1号”的高效植株再生体系，为软枣猕猴桃及其优良品种的开发利用和工厂化育苗奠定了基础。
参考文献
[1] 苍晶，王学东，张达，等.软枣猕猴桃果实生长发育的研究[J].东北农业大学学报，2004，35（1）：77-83.
[2] 王占勤，米建海，纪虎娃，等. 野生软枣猕猴桃果实品质初步研究[J].山西林业科技，2011，40（3）：26-27.
[3] 朴一龙，赵兰花.延边地区软枣猕猴桃资源分布和开发利用前景[J].延边大学农学学报，2009，31（1）：32-35.
[4] 张伟庆，李红莉.软枣猕猴桃播种栽培技术初探[J].林业勘查设计，2009（3）：100-101.
[5] 龙茹，秘树青，王子华，等.外源激素对软枣猕猴桃硬枝扦插生根的影响[J].河北科技师范学院学报，2010，24（2）：12-15.
[6] 顾地周，高捍东，王玉方，等.基于均匀设计法优化长白瑞香离体培养及种质试管保存体系[J].山东农业大学学报（自然科学版），2011，42（1）：23-29.
关键词软枣猕猴桃；“寒玉1号”；腋芽；组织培养
中图分类号S663.4文献标识码A文章编号0517-6611（2017）22-0098-03
Abstract [Objective] To explore the suitable tissue culture technique for Actinidia arguta “Hanyu No.1”. [Method] With axillary bud as explant， the best disinfection method was filtered， and the NAA， 6BA concentration were selected. [Result] The best disinfection methods were 5% NaClO 8 min+0.1%HgCl2 6 min or 9 min， 5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 6 min， in which the mortality rate and contamination rate were lower. The best medium of inducing germinating of explant was WPM+6BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L， in which the ratio of proliferation was 5.6 and the height of plant was 3.9 cm. The best medium of inducing rooting from cluster buds was WPM+NAA 0.3 mg/L， in which the rate of rooting was 100%， the average number of root was 4.4 and the average length of root was 5.2 cm. [Conclusion] It concluded that Actinidia arguta “Hanyu No.1” can adopt the method of tissue culture for rapid propagation.
Key wordsActinidia arguta；“Hanyu No.1”；Axillary bud；Tissue culture
軟枣猕猴桃（Actinidia arguta），属于猕猴桃科猕猴桃属，是多年生藤本落叶植物，别名软枣子、猕猴桃、猕猴梨、中华软枣猕猴桃等。软枣猕猴桃果实可食用，富含多种营养成分，具有很高的营养和经济价值[1]，可加工成果脯、罐头、果汁、果醬，也可以用来制作糕点或酿酒等[2]。软枣猕猴桃还可药用，具有健胃、解热、止血等功能，其根及根皮对消化道癌症具有一定的抑制和治疗作用[3]。软枣猕猴桃属于雌雄异株植物，以野生为主，果实的产量和质量不高。自20世纪90年代开始驯化人工栽培，多采用种子播种、枝条扦插等方式进行常规繁殖。种子繁殖存在无法辨别雌雄植株的缺点，扦插等繁殖方法存在繁殖系数低等缺点，很难满足市场的需求[4-5]。为了快速获得大量可结果雌株，对其组培技术进行研究，通过筛选最佳消毒方法和植物生长调节物质使用浓度，建立高效快速繁殖体系，以期为软枣猕猴桃的大面积推广栽培提供支持。
1材料与方法
1.1材料
试验材料为软枣猕猴桃“寒玉1号”枝条，实验室内水培促使其腋芽萌发，取新生3～5 cm腋芽进行试验。
1.2方法
1.2.1腋芽消毒方法。
将腋芽剪切成2 cm长的小段置于无菌瓶内，用5% NaClO和0.1% HgCl2浸泡消毒，消毒时间如下：X1（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 3 min），X2（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min），X3（5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 9 min），X4（5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 3 min），X5（5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min），X6（ 5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 9 min）。NaClO和HgCl2浸泡消毒后再用无菌水冲洗3次，最后放入带有滤纸的无菌培养皿上备用。
1.2.2腋芽增殖培养。
将消毒后的腋芽接种到增殖培养基中，培养基配方如下：Y1（WPM+6-BA 2.0 mg/L），Y2（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y3（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y4（WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y5（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y6（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y7（WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L），Y8（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L），Y9（WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L），Y10（WPM+6-BA 4.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L）。每瓶培养基接种5个腋芽，每个处理接种5瓶，重复3次。统计腋芽增殖系数（增殖系数=再生丛生芽总数/接种腋芽总数）、平均株高等。 1.2.3生根培养。
将组培增殖形成的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养，培养基配方如下：G1（WPM+NAA 0.1 mg/L），G2（WPM+NAA 0.2 mg/L），G3（WPM+NAA 0.3 mg/L），G4（WPM+NAA 0.4 mg/L），G5（WPM+IBA 0.1 mg/L），G6（WPM+IBA 0.2 mg/L），G7（WPM+IBA 0.3 mg/L），G8（WPM+IBA 0.4 mg/L）。每瓶培养基接种5个丛生芽苗，每个处理接种5瓶，重复3次。每天定期观察统计其生根时间，20 d后计算生根率（生根率=生根苗数/接种苗数）、每株苗生根数、根长等指标。
1.2.4培养条件。
培养温度为（21±2）℃，空气相对湿度 40%～50%，光照时间 12 h/d，光强为1 500～2 000 lx[6]。
1.3数据处理与分析
用Excel 2003对数据进行计算，用SPSS16.0软件进行统计分析。
2结果与分析
2.1不同处理外植体生长情况
接种7 d后，对不同消毒方法外植体的污染率和褐化率进行统计，结果见表1。由表1可知，X3和X6处理外植体污染率较低，二者间差异不显著。X1处理污染率最高，达33.3%。X6处理外植体褐化率最高，为30.7%。X1 、X2和X4处理外植体褐化率较低，3个处理间差异不显著。固定NaClO消毒时间，随着HgCl2 消毒时间的延长，污染率会逐渐降低，褐化率会逐渐增高。固定HgCl2 消毒时间，随着NaClO消毒时间的延长，在污染率方面，除X1和X4 处理差异显著外，其他处理变化不显著；在褐化率方面，除X1和X4 处理差异不显著外，其他处理差异显著。这说明NaClO和HgCl2对外植体的消毒及褐化均产生了一定的作用。综合考虑，X2 、X3和X5处理在软枣猕猴桃“寒玉1号”外植体消毒方面为较适宜的方法。
2.2不同处理腋芽增殖情况
腋芽接种30 d后，调查其增殖情况，结果见表2。腋芽接种及增殖生长情况见图1a、b。
由表2可知，10种不同的培养基均能诱导外植体增殖，Y6处理的腋芽增殖系数最高，为5.6；增殖苗株高最高，为3.9 cm，均显著高于其他处理。这说明在诱导腋芽增殖上Y6处理为
适宜的培养基配方。固定6-BA浓度，随着NAA浓度的增大，增殖系数出现先增后降的现象。当6-BA浓度为2.0和3.0 mg/L时，随着NAA浓度的增大，株高出现先增后降的现象；当6-BA浓度为4.0 mg/L时，随着NAA浓度的增大，株高出现下降的现象。固定NAA浓度，随着6-BA浓度的增大，增殖系数和株高均出现先增后降的现象。
2.3不同处理组培苗生根情况
接种后20 d，调查组培苗生根情况，结果见表3和图1c。由表3可知，丛生芽苗在附加不同浓度IBA和NAA的培养基上均能生根。G3、G4、G7处理的生根率均为100%，显著高于其他处理。G3处理的生根时间最短，为5 d。G3处理的根数和根长表现最好，根数为4.4条，根长为5.2 cm，均显著高于其他处理。在提高生根时间和生根率方面，适宜浓度的IBA和NAA均能达到良好的效果，但在促进根数及根长方面NAA效果优于IBA。综合各因素考虑，G3处理为促进软枣猕猴桃“寒玉1号”组培苗生根的适宜培养基配方。
3结论与讨论
通过对6种不同消毒方法进行比较发现，不同消毒剂的处理时间对软枣猕猴桃外植体的消毒效果有较大影响，5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min，5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min这3个处理为外植体适宜消毒方法；在增殖培養过程中，WPM+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L为腋芽增殖最佳培养基，低浓度的NAA对丛生芽的诱导有促进作用，浓度过高会对诱导有抑制作用；在生根培养过程中，WPM+NAA 0.3 mg/L为最佳生根培养基，在提高生根时间和生根率方面，適宜浓度的IBA和NAA均能达到良好的效果，但在促进根数及根长方面NAA效果优于IBA。
目前，国内外已有许多软枣猕猴桃优良品种的人工繁殖及栽培获得成功。我国具有丰富的野生软枣猕猴桃品种资源，但这些品种人工繁殖并开发利用的极少。软枣猕猴桃的开发利用研究还需要进一步的努力。该研究建立了软枣猕猴桃“寒玉1号”的高效植株再生体系，为软枣猕猴桃及其优良品种的开发利用和工厂化育苗奠定了基础。
参考文献
[1] 苍晶，王学东，张达，等.软枣猕猴桃果实生长发育的研究[J].东北农业大学学报，2004，35（1）：77-83.
[2] 王占勤，米建海，纪虎娃，等. 野生软枣猕猴桃果实品质初步研究[J].山西林业科技，2011，40（3）：26-27.
[3] 朴一龙，赵兰花.延边地区软枣猕猴桃资源分布和开发利用前景[J].延边大学农学学报，2009，31（1）：32-35.
[4] 张伟庆，李红莉.软枣猕猴桃播种栽培技术初探[J].林业勘查设计，2009（3）：100-101.
[5] 龙茹，秘树青，王子华，等.外源激素对软枣猕猴桃硬枝扦插生根的影响[J].河北科技师范学院学报，2010，24（2）：12-15.
[6] 顾地周，高捍东，王玉方，等.基于均匀设计法优化长白瑞香离体培养及种质试管保存体系[J].山东农业大学学报（自然科学版），2011，42（1）：23-29.