软枣猕猴桃“寒玉1号”组培技术研究

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  摘要[目的]探索软枣猕猴桃“寒玉1号”适宜组培方法。[方法]以新生腋芽为外植体,筛选最佳消毒方法,并对影响其生长的NAA、6-BA 等生长调节物质的浓度进行筛选。[结果]以5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min,5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min为适宜消毒方法,污染率和褐化率均较低;腋芽在WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基中增殖效果最佳,增殖系数可达5.6,株高3.9 cm;丛生芽在WPM+NAA 0.3 mg/L培养基中诱导生根效果最佳,生根率可达100%,平均根条数为4.4条,平均根长为5.2 cm。[结论]软枣猕猴桃“寒玉1号”可采用组织培养的方法进行快速繁殖。
  关键词软枣猕猴桃;“寒玉1号”;腋芽;组织培养
  中图分类号S663.4文献标识码A文章编号0517-6611(2017)22-0098-03
  Abstract [Objective] To explore the suitable tissue culture technique for Actinidia arguta “Hanyu No.1”. [Method] With axillary bud as explant, the best disinfection method was filtered, and the NAA, 6BA concentration were selected. [Result] The best disinfection methods were 5% NaClO 8 min+0.1%HgCl2 6 min or 9 min, 5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 6 min, in which the mortality rate and contamination rate were lower. The best medium of inducing germinating of explant was WPM+6BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L, in which the ratio of proliferation was 5.6 and the height of plant was 3.9 cm. The best medium of inducing rooting from cluster buds was WPM+NAA 0.3 mg/L, in which the rate of rooting was 100%, the average number of root was 4.4 and the average length of root was 5.2 cm. [Conclusion] It concluded that Actinidia arguta “Hanyu No.1” can adopt the method of tissue culture for rapid propagation.
  Key wordsActinidia arguta;“Hanyu No.1”;Axillary bud;Tissue culture
  軟枣猕猴桃(Actinidia arguta),属于猕猴桃科猕猴桃属,是多年生藤本落叶植物,别名软枣子、猕猴桃、猕猴梨、中华软枣猕猴桃等。软枣猕猴桃果实可食用,富含多种营养成分,具有很高的营养和经济价值[1],可加工成果脯、罐头、果汁、果醬,也可以用来制作糕点或酿酒等[2]。软枣猕猴桃还可药用,具有健胃、解热、止血等功能,其根及根皮对消化道癌症具有一定的抑制和治疗作用[3]。软枣猕猴桃属于雌雄异株植物,以野生为主,果实的产量和质量不高。自20世纪90年代开始驯化人工栽培,多采用种子播种、枝条扦插等方式进行常规繁殖。种子繁殖存在无法辨别雌雄植株的缺点,扦插等繁殖方法存在繁殖系数低等缺点,很难满足市场的需求[4-5]。为了快速获得大量可结果雌株,对其组培技术进行研究,通过筛选最佳消毒方法和植物生长调节物质使用浓度,建立高效快速繁殖体系,以期为软枣猕猴桃的大面积推广栽培提供支持。
  1材料与方法
  1.1材料
  试验材料为软枣猕猴桃“寒玉1号”枝条,实验室内水培促使其腋芽萌发,取新生3~5 cm腋芽进行试验。
  1.2方法
  1.2.1腋芽消毒方法。
  将腋芽剪切成2 cm长的小段置于无菌瓶内,用5% NaClO和0.1% HgCl2浸泡消毒,消毒时间如下:X1(5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 3 min),X2(5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min),X3(5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 9 min),X4(5% NaClO 10 min+0.1%HgCl2 3 min),X5(5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min),X6( 5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 9 min)。NaClO和HgCl2浸泡消毒后再用无菌水冲洗3次,最后放入带有滤纸的无菌培养皿上备用。
  1.2.2腋芽增殖培养。
  将消毒后的腋芽接种到增殖培养基中,培养基配方如下:Y1(WPM+6-BA 2.0 mg/L),Y2(WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L),Y3(WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L),Y4(WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L),Y5(WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L),Y6(WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L),Y7(WPM+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L),Y8(WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L),Y9(WPM+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L),Y10(WPM+6-BA 4.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L)。每瓶培养基接种5个腋芽,每个处理接种5瓶,重复3次。统计腋芽增殖系数(增殖系数=再生丛生芽总数/接种腋芽总数)、平均株高等。   1.2.3生根培养。
  将组培增殖形成的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养,培养基配方如下:G1(WPM+NAA 0.1 mg/L),G2(WPM+NAA 0.2 mg/L),G3(WPM+NAA 0.3 mg/L),G4(WPM+NAA 0.4 mg/L),G5(WPM+IBA 0.1 mg/L),G6(WPM+IBA 0.2 mg/L),G7(WPM+IBA 0.3 mg/L),G8(WPM+IBA 0.4 mg/L)。每瓶培养基接种5个丛生芽苗,每个处理接种5瓶,重复3次。每天定期观察统计其生根时间,20 d后计算生根率(生根率=生根苗数/接种苗数)、每株苗生根数、根长等指标。
  1.2.4培养条件。
  培养温度为(21±2)℃,空气相对湿度 40%~50%,光照时间 12 h/d,光强为1 500~2 000 lx[6]。
  1.3数据处理与分析
  用Excel 2003对数据进行计算,用SPSS16.0软件进行统计分析。
  2结果与分析
  2.1不同处理外植体生长情况
  接种7 d后,对不同消毒方法外植体的污染率和褐化率进行统计,结果见表1。由表1可知,X3和X6处理外植体污染率较低,二者间差异不显著。X1处理污染率最高,达33.3%。X6处理外植体褐化率最高,为30.7%。X1 、X2和X4处理外植体褐化率较低,3个处理间差异不显著。固定NaClO消毒时间,随着HgCl2 消毒时间的延长,污染率会逐渐降低,褐化率会逐渐增高。固定HgCl2 消毒时间,随着NaClO消毒时间的延长,在污染率方面,除X1和X4 处理差异显著外,其他处理变化不显著;在褐化率方面,除X1和X4 处理差异不显著外,其他处理差异显著。这说明NaClO和HgCl2对外植体的消毒及褐化均产生了一定的作用。综合考虑,X2 、X3和X5处理在软枣猕猴桃“寒玉1号”外植体消毒方面为较适宜的方法。
  2.2不同处理腋芽增殖情况
  腋芽接种30 d后,调查其增殖情况,结果见表2。腋芽接种及增殖生长情况见图1a、b。
  由表2可知,10种不同的培养基均能诱导外植体增殖,Y6处理的腋芽增殖系数最高,为5.6;增殖苗株高最高,为3.9 cm,均显著高于其他处理。这说明在诱导腋芽增殖上Y6处理为
  适宜的培养基配方。固定6-BA浓度,随着NAA浓度的增大,增殖系数出现先增后降的现象。当6-BA浓度为2.0和3.0 mg/L时,随着NAA浓度的增大,株高出现先增后降的现象;当6-BA浓度为4.0 mg/L时,随着NAA浓度的增大,株高出现下降的现象。固定NAA浓度,随着6-BA浓度的增大,增殖系数和株高均出现先增后降的现象。
  2.3不同处理组培苗生根情况
  接种后20 d,调查组培苗生根情况,结果见表3和图1c。由表3可知,丛生芽苗在附加不同浓度IBA和NAA的培养基上均能生根。G3、G4、G7处理的生根率均为100%,显著高于其他处理。G3处理的生根时间最短,为5 d。G3处理的根数和根长表现最好,根数为4.4条,根长为5.2 cm,均显著高于其他处理。在提高生根时间和生根率方面,适宜浓度的IBA和NAA均能达到良好的效果,但在促进根数及根长方面NAA效果优于IBA。综合各因素考虑,G3处理为促进软枣猕猴桃“寒玉1号”组培苗生根的适宜培养基配方。
  3结论与讨论
  通过对6种不同消毒方法进行比较发现,不同消毒剂的处理时间对软枣猕猴桃外植体的消毒效果有较大影响,5% NaClO 8 min+0.1% HgCl2 6 min或9 min,5% NaClO 10 min+0.1% HgCl2 6 min这3个处理为外植体适宜消毒方法;在增殖培養过程中,WPM+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L为腋芽增殖最佳培养基,低浓度的NAA对丛生芽的诱导有促进作用,浓度过高会对诱导有抑制作用;在生根培养过程中,WPM+NAA 0.3 mg/L为最佳生根培养基,在提高生根时间和生根率方面,適宜浓度的IBA和NAA均能达到良好的效果,但在促进根数及根长方面NAA效果优于IBA。
  目前,国内外已有许多软枣猕猴桃优良品种的人工繁殖及栽培获得成功。我国具有丰富的野生软枣猕猴桃品种资源,但这些品种人工繁殖并开发利用的极少。软枣猕猴桃的开发利用研究还需要进一步的努力。该研究建立了软枣猕猴桃“寒玉1号”的高效植株再生体系,为软枣猕猴桃及其优良品种的开发利用和工厂化育苗奠定了基础。
  参考文献
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