【摘 要】
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为了获得重组CHO细胞持续高效表达HBsAg的最佳条件,应用填充床生物反应器和聚酯片,连续灌流培养分泌HBsAg的重组CHO细胞,考察灌流培养基中葡萄糖浓度对细胞代谢和HBsAg生产的
【机 构】
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军事医学科学院输血研究所,北京,100850军事医学科学院毒物药物研究所,北京,100850;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
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为了获得重组CHO细胞持续高效表达HBsAg的最佳条件,应用填充床生物反应器和聚酯片,连续灌流培养分泌HBsAg的重组CHO细胞,考察灌流培养基中葡萄糖浓度对细胞代谢和HBsAg生产的影响.连续培养60天,细胞密度可达5.0×106/ml.灌流培养液中葡萄糖浓度从5.0g/L增加到7.6g/L时,葡萄糖消耗速率和乳酸浓度均随之上升.当葡萄糖浓度继续增加至9.3g/L时,葡萄糖消耗速率和乳酸浓度呈下降趋势;当将葡萄糖浓度降回至7.6g/L后又开始回升.培养过程中最高抗原滴度达1:512,出现在以含5.0g/L葡萄糖的培养液灌流阶段的末期,即第26天,维持10天左右即迅速下降至1:128水平.共收液335L,纯化后获得抗原蛋白213.04mg,平均产率为635.94μg/L,较传统转瓶工艺(414μg/L)提高53.6%.表明CHO细胞较长时间处于高乳酸水平下(＞30mmol/L)会严重影响产物的表达,应控制灌流培养液中的葡萄糖浓度在较低水平,或通过适当提高灌流速率使培养基中乳酸水平维持在较低水平,从而有利于HBsAg的高效稳定表达.
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