【摘 要】
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目的 建立和鉴定脐带间充质细胞( UMC)来源的诱导性多潜能干细胞(iPS).方法 以逆转录病毒作为Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因转移载体,将UMC细胞编程为iPS细胞.应用RT-PCR检测
【机 构】
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南方医科大学,中国人民解放军三0五医院,南方医科大学再生医学研究所
【基金项目】
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全军医药卫生科研基金资助项目;国家自然科学基金;科学技术部863计划项目
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目的 建立和鉴定脐带间充质细胞( UMC)来源的诱导性多潜能干细胞(iPS).方法 以逆转录病毒作为Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因转移载体,将UMC细胞编程为iPS细胞.应用RT-PCR检测细胞基因表达量,鉴定外源编程基因是否整合到iPS细胞核内,分析细胞核型,对细胞进行碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色,体内分化畸胎瘤和体外分化拟胚体实验,对建立的iPS细胞进行鉴定.结果 (1)iPS细胞形态学上类似于胚胎干细胞(ES).(2)iPS与ES细胞内源多能基因(Nanog、Oct-4、Rex1、Sox-2)表达谱相类似,外源编程基因(Sox-2、Klf-4、Oct-4、c-Myc)表达发生沉默.(3)外源编程基因已被插入到iPS细胞核内.(4)iPS细胞核型正常,碱性磷酸酶活性增高,表达ES细胞特异性膜蛋白(SSEA3、SSEA4),质蛋白(TRA-1 -60、TRA-1-81),核蛋白(Nanog).(5)iPS细胞在体内能分化为畸胎瘤,在体外能分化为拟胚体.结论 iPS细胞类似于ES细胞具有多向分化潜能.
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