观察氯通道阻断剂5-硝基-2 (3-苯丙胺) 苯甲酸 (NPPB) 和二异硫氰基芪-2,2'-二磺酸 (DIDS) 对碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 诱导的人永生系晶状体上皮细胞 (HLE) B-3增殖的影响。
方法实验研究。取对数生长期的HLE B-3细胞为研究对象,用10μg/L bFGF作用的细胞作为bFGF组,常规培养的细胞作为空白对照组,NPPB (50、100、150μmol/L) 及DIDS (10、50、100μmol/L) 分别加入含b FGF的HLE B-3细胞的培养液中共同作用24 h、48 h及72 h,采用CCK-8法、免疫细胞化学法及PI单染流式细胞术检测细胞增殖率、细胞增殖核抗原Ki-67蛋白的表达率及细胞周期的变化,进而观察氯通道阻断剂对其影响。不同浓度的NPPB和DIDS在三个时间段作用后A值差异比较采用双因素方差分析,组内各因素的多重比较采用LSD-t检验。各组细胞Ki-67表达情况及细胞周期构成比均采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验,空白对照组与bFGF处理组的两样本比较采用t检验。
结果CCK-8检测表明10μg/L bFGF对HLE B-3细胞具有促增殖作用,24 h、48 h及72 h的增殖率分别为 (18.77±6.53) %、 (92.15±8.38) %和 (37.09±2.89) %。不同浓度NPPB和DIDS在3个时间段内作用细胞后A值的变化表现出剂量及时间依赖性 (bFGF+ NPPB组:F时间=305.28,F浓度=18.76,P=0.000;b FGF+ DIDS组:F时间=94.43,F浓度=24.41,P=0.000),其中在作用48 h及72 h后,与bFGF处理组比较,各浓度的NPPB和DIDS均使得细胞A值有着明显的下降 (P<0.05) 。不同浓度的NPPB和DIDS作用于细胞48 h后,细胞内Ki-67蛋白表达细胞数有不同程度下降,差异存在统计学意义 (bFGF+ NPPB组:F=580.32,P=0.000;bFGF+ DIDS组:F=507.43,P=0.000),其中150μmol/L NPPB组和100μmol/L DIDS组Ki-67的阳性细胞率分别下降至 (18.32±1.23) %和 (11.21±1.02) %,与b FGF处理组相比较,差异均有统计学意义 (P<0.01,P<0.01) 。药物作用48 h后PI染色流式细胞周期检测结果,b FGF组G0/G1期及S期细胞比例分别为 (45.35±1.00) %和 (31.51±1.04) %,150μmol/L NPPB组G0/G1期细胞比例升高至 (66.53±1.28) %,S期减少至 (15.49±1.31) %,100μmol/L DIDS组G0/G1期细胞比例分别升高至 (67.37±0.63) %,S期减少至 (13.88±0.53) %,与bFGF组相比差异均存在统计学意义 (F=390.75,P=0.000;F=166.24,P=0.000) 。
结论NPPB和DIDS能够抑制bFGF诱导的HLE B-3细胞增殖,并在G1/S期限制点抑制其进入S期。(中华眼科杂志,2013,49:1014-1019)