【摘 要】
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利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004（H1N1）（A/S/TJ/04）。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PH
【机 构】
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华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室
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利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004（H1N1）（A/S/TJ/04）。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序
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