【摘 要】
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目的 建立测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度的UHPLC-MS/MS法.方法 以甲基叔丁基醚-二氯甲烷(2∶1)沉淀蛋白处理血浆样品,氘代利伐沙班(利伐沙班-d4为内标,采用Thermo BDS Hype
【机 构】
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瀚晖制药有限公司,杭州311400
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目的 建立测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度的UHPLC-MS/MS法.方法 以甲基叔丁基醚-二氯甲烷(2∶1)沉淀蛋白处理血浆样品,氘代利伐沙班(利伐沙班-d4为内标,采用Thermo BDS Hypersil C18色谱柱(100 mmx4.6 mm,2.4 μm);流动相:A相为甲醇溶液(含0.015 mol·L-1甲酸铵和0.1％甲酸);B相为水-甲醇(90∶10)溶液(含0.015 mol·L-1甲酸铵和0.1％甲酸),梯度洗脱.质谱条件为电喷雾离子源,正离子模式检测,扫描方式为多反应离子监测.用于定量检测的离子反应分别为[M+H]+ m/z 436@30 eV→m/z 144.900(利伐沙班)和[M+H]+m/z 440@24 eV→m/z 144.900(利伐沙班-d4).结果 血浆利伐沙班浓度在0.5～400 ng·mL-1内线性关系良好(r=0.996 1),定量下限为0.5 ng·mL-1,批内、批间精密度均＜13％,提取回收率89.4％～96.5％,基质效应94.7％～97.2％.血浆样品冻存(-80℃)33 d稳定性良好,反复冻融3次及提取后室温放置12h条件下,样品浓度均无显著变化.将本法应用于Beagle犬口服给予利伐沙班片后的药动学考察,主要药动学参数如下:Tmax(2.11±1.133)h,Cmax(179.3±50.65)ng·mL-1,t1/2(10.05±4.34)h,AUC0-t(1 161.6±339.74)h·ng·mL-1.结论 试验结果表明本法操作简单,灵敏度高,重复性良好,结果准确可靠,可用于测定Beagle犬血浆中利伐沙班浓度和其体内的药动学研究.
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