【摘 要】
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目的探究脂肪来源干细胞(humanadipose-derived stemcells, ADSCs)不同成骨分化阶段分泌的外泌体(ADSC-Exos促进原始ADSCs成骨矿化的能力,选择最适宜的外泌体提取时间区间,证
【机 构】
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中国医科大学附属第一医院整形外科; 大连医科大学附属第一医院干细胞临床研究机构;
【基金项目】
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国家自然科学基金(51272286);国家卫计委公益性行业科研专项(2015SQ00049);辽宁省自然科学基金(20102296)
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目的探究脂肪来源干细胞(humanadipose-derived stemcells, ADSCs)不同成骨分化阶段分泌的外泌体(ADSC-Exos促进原始ADSCs成骨矿化的能力,选择最适宜的外泌体提取时间区间,证明其能够进入ADSCs内进行调控。方法酶消化法分离培养原代ADSCs并进行鉴定;超速离心法提取ADSCs未成骨诱导(Exo0)、成骨诱导1～14 d(Exo14)及15～28 d(Exo28)的外泌体,并采用透射电镜,Western blot,动态光散射法进行鉴定;使用茜素红染色检测比较3种ADSC-Exos促进原始ADSCs成骨分化的能力;PKH67标记Exo14检测ADSCs对其摄取的能力。结果所获取的ADSCs符合间充质干细胞鉴定标准。所获取的外泌体具有典型的外泌体形态特征,粒径大小符合外泌体标准;Western blot检测外泌体CD63,CD9呈阳性表达。茜素红染色表明,Exo14组矿化结节含量(AExo14=1.851±0.064)明显高于Exo28组(AExo28=0.097±0.003)。Exo0组与PM组(阴性对照组)相比,钙结节含量无差别(P=0.124)。PKH67标记的外泌体能够被ADSCs摄取进入细胞。结论 ADSCs成骨诱导1～14 d分泌的外泌体Exo14能够被原始的ADSCs高效摄取,并进入细胞内独立作用诱导ADSCs成骨矿化。
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