观察腺病毒载体介导的Survivin基因敲减对创伤性脑损伤(TBI)后成年小鼠海马齿状回凋亡和学习记忆功能的影响。
方法选择成年雄性C57BL/6小鼠112只,按随机数字表法分为假手术组、TBI组、阴性对照组和Survivin基因敲减组(敲减组),每组28只。制作小鼠TBI液压打击模型。阴性对照组TBI后立即立体定向注射含有阴性对照RNA的重组腺病毒;敲减组TBI后立即立体定向注射含有shRNA的重组腺病毒。假手术组给予除液压打击外的所有步骤;TBI组单纯接受液压打击。利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot及免疫荧光检测敲减后Survivin基因在创伤脑组织中的表达,采用TUNEL免疫荧光检测小鼠海马齿状回细胞凋亡的情况。利用Morris水迷宫检测Survivin基因敲减对小鼠学习记忆功能的影响。
结果RT-PCR和Western blot检测显示TBI后3 d,敲减组Survivin mRNA表达量和蛋白水平较阴性对照组明显减低(1.21±0.11 vs. 4.05±0.30; 0.34±0.08 vs. 1.11±0.17)(P均<0.01);免疫荧光检测显示敲减组Survivin阳性细胞数量(267.45±38.41)低于阴性对照组(896.56±102.23)(P<0.01);在TBI后3 d,敲减组小鼠齿状回TUNEL阳性细胞数量(416.1±29.0)较阴性对照组(250.2±20.8)显著增加(P<0.01)。Morris水迷宫结果显示敲减组小鼠逃避潜伏期较阴性对照组长(P<0.05),象限百分比较阴性对照组低(P<0.01)。
结论腺病毒载体介导的Survivin基因敲减可以促进TBI后成年小鼠海马齿状回的凋亡,同时可以导致小鼠学习和记忆功能降低。