【摘 要】
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本试验旨在研究双酚A(BPA)对猪肾细胞炎性因子表达和凋亡的影响.以猪肾细胞(PK15)为试验材料,设置不同浓度(0、1、10、100、200、500和1000μmol/L)和时间梯度(0、2、4、6 h)BPA处理PK15细胞,CCK-8检测细胞活力;琼脂糖凝胶电泳分析RNA、cDNA的高质量性与引物扩增条带大小;qRT-PCR检测炎性相关因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和凋亡相关基因(Caspase3、BAX、BCL-2)mR
【机 构】
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浙江农林大学动物科技学院动物医学院,浙江杭州 311300;浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室,浙江杭州 311300;浙江省安吉振望农牧科技有限公司,浙江湖州 313300
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本试验旨在研究双酚A(BPA)对猪肾细胞炎性因子表达和凋亡的影响.以猪肾细胞(PK15)为试验材料,设置不同浓度(0、1、10、100、200、500和1000μmol/L)和时间梯度(0、2、4、6 h)BPA处理PK15细胞,CCK-8检测细胞活力;琼脂糖凝胶电泳分析RNA、cDNA的高质量性与引物扩增条带大小;qRT-PCR检测炎性相关因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和凋亡相关基因(Caspase3、BAX、BCL-2)mRNA表达水平;免疫荧光检测细胞凋亡和ROS水平.结果表明:随着BPA浓度增加和处理时间的延长,细胞活力逐渐降低,当BPA浓度大于200μmol/L,作用6 h时,细胞活力降低(P<0.05);RNA的28S、18S和5S条带清晰,引物扩增条带单一且片段大小符合预期;与对照组相比,BPA处理后IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量升高(P<0.05),Caspase3和BAX mRNA相对表达量升高,BCL-2 mRNA相对表达量降低(P<0.05);BPA增加凋亡细胞数和ROS水平(P<0.01).综上,BPA促进细胞凋亡和炎性反应,诱导PK15细胞产生过量的ROS.
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