【摘 要】
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构建含不同Kozak序列的绿色荧光蛋白（GFP）基因真核表达载体，并检测它们在HEK293细胞中的表达差异。通过设计突变的PCR引物改变目的基因GFP的Kozak序列，＋4位碱基分别为A和G且不改变
【机 构】
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中国人民解放军总医院老年医学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金资助(No.30472172)~~
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构建含不同Kozak序列的绿色荧光蛋白（GFP）基因真核表达载体，并检测它们在HEK293细胞中的表达差异。通过设计突变的PCR引物改变目的基因GFP的Kozak序列，＋4位碱基分别为A和G且不改变氨基酸编码，将PCR扩增的GFP片段与载体pcDNA3．1进行酶切、连接、转化、鉴定。成功构建的pHGFP-A，pHGFP-G质粒采用脂质体法转染HEK293细胞，荧光显微镜下观察绿色荧光表达，流式细胞术检测目的蛋白GFP的荧光表达阳性率，Western blot检测目的蛋白GFP的表达。构建的两质粒均能有效转
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