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以0.02%胰酶4℃过夜消化,分离表皮,37℃消化30min,打成单细胞悬液,经100μg/mLⅣ型胶原处理的培养皿黏附10min,除掉未黏附的细胞,加入培养基(80%DMEM-F12+20%FBS+氢化可的松(25μg/mL)+青霉素(100IU/mL)+链霉素(100μg/mL)+胰岛素(15μg/mL)+转铁蛋白+EGF(20μg/mL))培养24h,而后将此细胞消化接种到经20μg/mL丝裂霉素C处理4h的成年绒山羊成纤维细胞滋养层上,培养2周后有各种形态的克隆状细胞集落出现,用碱性磷酸酶(AKP