【摘 要】
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目的 探讨CRISPR/CAS9靶向敲除Oct3/4基因后化疗药物索拉菲尼(Sorafenib)对肝癌细胞的作用影响.方法 通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405和人肝正常细胞LX-2中Oct3/4的表达水平.通过CRISPR设计工具(http://crispr.mit.edu/)设计靶向Oct3/4的gRNA,并通过CRISPR/CAS9技术敲除肝癌细胞HepG2的Oct3/4,评估Oct3/4缺失情况下,化疗药物Sorafenib对肝癌细胞Hep
【机 构】
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471000 郑州大学附属洛阳中心医院
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目的 探讨CRISPR/CAS9靶向敲除Oct3/4基因后化疗药物索拉菲尼(Sorafenib)对肝癌细胞的作用影响.方法 通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405和人肝正常细胞LX-2中Oct3/4的表达水平.通过CRISPR设计工具(http://crispr.mit.edu/)设计靶向Oct3/4的gRNA,并通过CRISPR/CAS9技术敲除肝癌细胞HepG2的Oct3/4,评估Oct3/4缺失情况下,化疗药物Sorafenib对肝癌细胞HepG2的凋亡水平和DNA损伤水平的影响.结果 Oct3/4在人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405中的mRNA表达水平显著高于人肝正常细胞LX-2(P<0.05);同时,Oct3/4在人肝癌细胞Li-7、HepG2、Huh7、BEL-7405中的蛋白表达水平也显著高于人肝正常细胞LX-2.使用CRISPR/CAS9对HepG2细胞进行基因编辑后,挑取嘌呤霉素筛选出的2个单克隆细胞株进行Oct3/4表达水平的检测,1#号单克隆细胞株Oct3/4表达水平低于野生型WT,2#号单克隆细胞株没有表达Oct3/4.测序后发现1#号基因组上的Oct3/4第1个外显子只有1条染色体缺失了2个碱基,另一条染色体并未缺失;2#号基因组上的Oct3/4第1个外显子2条染色体均存在不同程度的缺失,一条缺失2个碱基,另一条缺失4个碱基.使用Sorafenib处理野生型HepG2细胞和2#Oct3/4 KO HepG2细胞后,Oct3/4 KO细胞株的凋亡水平显著上升(P<0.05),DNA损伤水平显著上升(P<0.05).结论 Oct3/4基因的敲除能够显著提高化疗药物Sorafenib促肝癌细胞凋亡和DNA损伤的作用.
其他文献
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目的:调查甲状腺癌幸存者的癌症复发恐惧水平并探讨其影响因素.方法:选取2019年1月—2021年1月在我院复查的146例甲状腺癌幸存者,采用汉化版恐惧疾病进展简化量表(FoP?Q?SF)、配偶恐惧疾病进展简化量表(FoP?Q?SF/P)、家庭坚韧性量表(FHI)及社会支持评定量表(SSRS)进行调查.结果:甲状腺癌幸存者中96例(65.8％)经历高水平癌症复发恐惧,其配偶中87名(59.6％)经历高水平癌症复发恐惧.多元线性回归分析显示,年龄、性别、家庭收入水平、FoP?Q?SF/P得分、FHI得分、SS
目的:探讨可量化式踝泵运动辅助器对预防腰椎骨折术后病人下肢深静脉血栓(DVT)形成的效果.方法:选取2020年1月—12月我院收治的腰椎骨折术后病人100例,随机分为两组,每组50例.治疗组在术后予以可量化式踝泵运动辅助器辅助进行踝泵运动,对照组予以常规踝泵运动.使用彩色多普勒超声检查评估两组病人下肢DVT形成情况,并检测治疗前及术后48 h D?二聚体、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FBG)、凝血酶时间(TT)变化.结果:相比于对照组,术后48 h治疗组D?二聚体
目的:探讨积极心理学团体护理干预对双相情感障碍病人康复效果的影响.方法:将符合入组标准的病人按入组的顺序分组,单号入研究组,双号入对照组,两组均实施疾病康复期护理干预,研究组在常规护理基础上接受积极心理学团体心理护理干预.采用幸福进取者问卷(HEIQ)、自测健康评定量表(SRHMS)对两组病人干预前、干预10周后的干预效果进行评价.结果:干预10周后收集到病例研究组42例,对照组41例.干预10周后研究组HEIQ(t=3.470,P<0.001)、SRHMS(t=5.800,P<0.001)量表总评分均高
目的:探讨耳穴压豆联合八段锦在2型糖尿病病人中的应用效果.方法:将2019年1月—2021年3月在我院就诊的80例2型糖尿病病人随机分为对照组40例和观察组40例.对照组给予常规护理,观察组在常规护理的基础上给予耳穴压豆联合八段锦辅助治疗,比较两组病人的糖代谢、脂代谢情况及临床疗效.结果:治疗1个月后,两组空腹血糖、餐后2h血糖水平均下降,且观察组糖代谢改善情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组总胆固醇、三酰甘油水平均降低,且观察组脂代谢水平优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05
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目的:了解全膝关节置换术(TKA)病人个人掌控感现状,并分析其影响因素.方法:采用便利抽样的方法选取2020年7月—2020年10月青岛市某三级甲等医院行TKA的189例病人为研究对象,采用一般资料调查表、个人掌控量表(PMS)、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)、视觉模拟评分量表(VAS)、社会支持评定量表(SSRS)进行调查,并分析TKA病人个人掌控感影响因素.结果:TKA病人PMS总分为19～32(26.01±2.75)分,VAS得分为0～8(3.97±1.80)分,HSS得分为14～65(46.