【摘 要】
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为解决化学合成法生产间苯三酚环境污染严重的问题,本研究设计2对不同的扩增间苯三酚合成关键基因phlD 的引物,对前期分离得到的270余株假单胞菌进行筛选.采用LC-MS法对筛选
【机 构】
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威海海洋职业学院,山东荣成264300;中国海洋大学,山东青岛266000;迪沙药业集团有限公司,山东威海264200;自然资源部第一海洋研究所,山东青岛266100
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为解决化学合成法生产间苯三酚环境污染严重的问题,本研究设计2对不同的扩增间苯三酚合成关键基因phlD 的引物,对前期分离得到的270余株假单胞菌进行筛选.采用LC-MS法对筛选出的目标菌株进行发酵产物检测,并对菌株进行种属鉴定及系统发育树构建;采用HPLC法测定其间苯三酚的产量,再利用正交试验优化菌株的发酵培养条件.结果显示,引物2在筛选产间苯三酚菌株方面效果较好,经LC-MS检测验证,筛选得到的海洋生境假单胞菌LBF-96发酵产物为间苯三酚,其经生理生化鉴定及16S核糖体RNA(16SrRNA)基因序列分析,确定为芸薹假单胞菌(Pseudomonas brassicacearum).该菌株在28℃、150 r/min条件下发酵培养至72 h时,间苯三酚的产量为0.23 g/L,经正交试验优化发酵培养条件后,菌株在30℃、pH 7.0、200 r/min条件下间苯三酚的产量最高,比优化前提高了 39％.这是关于芸薹假单胞菌产间苯三酚的首次报道,为间苯三酚的生物合成提供了新的种质资源.
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