目的建立玄参药材的HPLC指纹图谱,并同时进行多成分含量测定,为玄参药材等级质量标准的制定提供方法和依据。方法采用HPLC-DAD法,Elipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温25℃,以乙腈(A)-0.03%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,进样量10μL,指纹图谱检测波长207 nm,含量测定的检测波长为哈巴苷210 nm、哈巴俄苷280 nm、肉桂酸264 nm。获取30批不同等级玄参药材的指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行分析,同时对3种主要化学成分进行含量测定。结果指纹图谱分析共指认7个共有峰,相对保留时间RSD值均小于2.0%,相对峰面积RSD值差异较大,提示玄参药材中的主要化学成分稳定存在,但含量差异较大;相似度分析中,约有5%的指纹图谱与对照药材的相似度低于0.7,12.5%的相似度在0.7～0.8,40%处于0.8～0.9,42.5%大于0.9,提示不同产地玄参药材的质量差异较大;不同批次玄参药材中3种化学成分含量差异较大,质量分数分别为哈巴苷0.18%～2.89%、哈巴俄苷0.01%～0.35%、肉桂酸0.01%～0.24%。结论建议在原有等级划分标准的基础上,增加指纹图谱和主要化学成分的含量测定两项指标。