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目的 探讨短发夹状RNA(shRNA)对C57BL/6J小鼠T淋巴细胞CD28共刺激分子基因沉默效应,评价shRNA对目的 基因干扰效应的时效性和稳定性,筛选出高效的干扰序列用于后期的动物实验.方法 首先构建3个载有CD28特异性shRNA(shRNA1～3)的表达质粒和1个非特异性shRNA表达质粒,将其分别转染小鼠脾淋巴细胞,以非特异性的shRNA表达质粒组和未转染组分别作为阴性对照和空白对照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平评价转染l～20 d内CD28 shRNA对CD28基因的干扰效应,并筛选出干扰效率最高的序列.结果 ①成功构建了CD28 shRNA表达载体;②3种CD28 shRNA均可在mRNA和蛋白质水平有效沉默目的 基因,与实验对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01):CD28 mRNA拷贝数持续降低,3种CD28 shRNA转染C57BL/6J小鼠脾细胞20 d,小鼠脾细胞CD28 mRNA拷贝绝对数分别下降了99.62%、99.89%和99.80%;CD28蛋白表达水平分别降低了(84.90±0.65)%、(96.49±0.03)%和(91.76±0.32)%,以CD28 shRNA 2组的抑制效率最高(P＜0.01).结论 ①特异性的CD28 shRNA可长期、稳定地介导CD28基因沉默;②针对CD28基因不同位点的不同shRNA也有干扰效率的差异。