【摘 要】
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建立实时荧光定量PCR现场快速检测方法，对生物恐怖战剂布鲁氏菌进行检测。根据NCBI获得16S核糖体RNA基因序列，应用生物信息学确定检测特异性序列，设计扩增引物。通过引物量、退火温度、退火时间，建立3水平3因素正交试验确定试验最佳反应条件，并分析反应的敏感性，利用溶解曲线分析反应的特异性，并采集室外环境积水和土壤样本进行实际测试。结果表明：反应最优条件为Sybr Green qPCR mix 1
【基金项目】
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河北省重点研发计划项目“布鲁氏菌生物恐袭现场快速检测与应急防控技术研究与示范”（19275602D）；
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建立实时荧光定量PCR现场快速检测方法，对生物恐怖战剂布鲁氏菌进行检测。根据NCBI获得16S核糖体RNA基因序列，应用生物信息学确定检测特异性序列，设计扩增引物。通过引物量、退火温度、退火时间，建立3水平3因素正交试验确定试验最佳反应条件，并分析反应的敏感性，利用溶解曲线分析反应的特异性，并采集室外环境积水和土壤样本进行实际测试。结果表明：反应最优条件为Sybr Green qPCR mix 10μL，上下游引物各0.8μL，超纯水7.4μL，引物1μL，检测反应的灵敏度为220 CFU·mL-1，溶解曲线峰值单一，特异性良好。为现场布鲁氏菌基因检测提供一种有效、可靠的快速检测手段。
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