【摘 要】
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目的 建立实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time recombinase polymerase amplification,real-timeRPA)检测大肠埃希氏菌O157的分析方法.方法 根据大肠埃希氏菌O157的rfbE基因
【机 构】
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广州海关技术中心,广州 510623广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室,广州 510623;华南理工大学生物科学与工程学院,广州 510006;广州海关技术中心,广州 510623;广东省
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目的 建立实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time recombinase polymerase amplification,real-timeRPA)检测大肠埃希氏菌O157的分析方法.方法 根据大肠埃希氏菌O157的rfbE基因(S83460.1),设计特异性引物和exo探针,分别进行引物探针筛选和特异性、灵敏度以及稳定性探究,并对人工污染样品和实际样品进行检测,验证本研究方法的实用性.结果 本方法在37℃恒温20 min内可完成对大肠埃希氏菌O157的定性检测,目的DNA的检测限为0.01 ng/μL,目的菌的检测限为103 CFU/mL.在稳定性实验中,选择从100～0.001 ng/μL的10倍梯度稀释的目的DNA进行每个浓度8个平行的测试,0.01 ng/μL及以上浓度的DNA的8个平行均可稳定检出.对于大肠埃希氏菌O157的初始污染量为4 CFU/25 g的牛奶和鸡肉人工污染样品,增菌9 h后,可检出其中的目的菌.用本方法和国标方法GB 4789.36-2016同时检测20份实际样品,结果一致.结论 该方法快速、简便,可作为一种常温下大肠埃希氏菌O157的快速检测手段,应用于基层实验室或现场检测.
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