【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-375(miR-375)靶向矮小同源盒基因(SHOX2)对肺癌细胞吉西他滨敏感性的影响.方法 体外培养非小细胞肺腺癌细胞株A549细胞,作为空白对照组;转染miR-375模拟物
【机 构】
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华中科技大学医院药剂科,武汉,430074华中科技大学医院外科,武汉,430074;华中科技大学同济医学院附属梨园医院药剂科,武汉,430074;
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目的 探讨微小RNA-375(miR-375)靶向矮小同源盒基因(SHOX2)对肺癌细胞吉西他滨敏感性的影响.方法 体外培养非小细胞肺腺癌细胞株A549细胞,作为空白对照组;转染miR-375模拟物质粒或空质粒至A549细胞,作为miR-375过表达组和阴性对照组.采用噻唑蓝法和Annexin V/PI双染法检测吉西他滨对各组细胞增殖和凋亡的影响.采用双荧光素酶报告基因方法验证miR-375与SHOX2的靶向关系.应用逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中miR-375和SHOX2基因的表达量;采用蛋白质印迹法检测各组细胞中SHOX2蛋白的表达量.采用荧光免疫检测法检测各组细胞β-连环蛋白表达情况.结果 miR-375过表达组miR-375表达量明显高于空白对照组和阴性对照组[(1.45±0.11)比(1.00±0.05)、(0.97±0.11)](均P＜0.05);且经不同浓度吉西他滨作用48 h后,miR-375过表达组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05);吉西他滨对miR-375过表达组A549细胞的半数抑制浓度为4.405 μmol/L.4.405 μmol/L吉西他滨作用24 h后,miR-375过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组[(28±4)％比(12±4)％、(14±4)％](P＜0.05).经双荧光素酶报告基因分析,SHOX2是miR-375的下游靶基因.miR-375过表达组SHOX2 mRNA和蛋白表达量均明显低于空白对照组和阴性对照组[(0.39±0.08)比(1.00±0.07)、(1.02±0.09);(0.42 ±0.07)比(0.97±0.10)、(1.05±0.12)](均P＜0.05).与空白对照组和阴性对照组相比,miR-375过表达组细胞中β-连环蛋白表达量和进入细胞核的量明显减少.结论 上调miR-375可抑制SHOX2激活Wnt/β-连环蛋白信号通路,从而增加A549细胞株对吉西他滨的敏感性.
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