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摘 要：该研究建立了使用固相萃取（SPE）小柱替代人工填充中性氧化铝玻璃层析柱、并通过对洗脱溶剂的优化进行预处理，采用高效液相色谱法检测食用植物油中苯并（α）芘的含量。目标物经过洗脱后，用液相色谱进行检测。實验结果表明，在1～20μg/L范围内线性关系良好，相关系数r2=0.999 95；检出限为0.15μg/kg，回收率达到93%～100%，该方法准确、灵敏，适用于各类植物油的苯并芘含量分析。
关键词：食用植物油苯并（α）芘（Bap）；固相萃取；高效液相色谱法
中图分类号 TS227 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）06-0163-02
1 引言
食用植物油是人们日常生活必需食品之一，而食用油中苯并（α）芘若超出限量标准，会造成对人们的身体健康造成不可逆转的伤害，被认为是高活性致癌剂，过量食入后将对人体造成严重的影响，因此各国对食用油中苯并（α）芘都有严格的使用限量规定。食用植物油苯并（α）芘以往采用人工填充中性氧化铝玻璃层析柱，样品前处理繁琐、时间长、消耗的试剂多，操作损失高，准确性和回收率均不理想。本文使用SPE小柱替代人工填充中性氧化铝玻璃层析柱、并通过对洗脱溶剂的优化进行预处理，应用高效液相色谱法进样进行检测，以期建立简便、快速、准确的检测方法。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂 Agilent 1260液相色谱仪（配荧光检测器），Sartorius BSA124S电子天平，Anpel DC-24氮吹仪，Vortex XH-B漩涡混匀器，昆山市超声仪器 KQ-300TDV超声波清洗器，Waters 20位固相萃取装置，Anpelcnw BAP苯并（α）芘SPE小柱。正己烷、二氯甲烷、丙酮、乙腈（色谱纯），实验用水为一级水。苯并（α）芘标准品（1mg/mL），Anpel。
2.2 标准溶液配制
2.2.1 标准储备液 准确吸取苯并（α）芘标准品0.1mL于10mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，浓度为10μg/mL。
2.2.2 标准工作液1 准确吸取0.1mL标准储备液于10mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，浓度为0.1μg/mL。
2.2.3 标准工作液2 将标准工作液1用丙酮稀释成1μg/L、4μg/L、8μg/L、12μg/L、20μg/L5个标准系列溶液。
2.3 液相色谱参考条件 色谱柱：多环芳烃分析柱，4.6mm×250mm，粒度5μm；进样量：20μL；流动相∶乙腈∶水为9∶1（体积比）；流速：1mL/min；柱温：30℃；荧光检测器：发射波长410nm，激发波长380nm。
2.4 样品前处理 准确称取0.5g植物油样于烧杯中，加入3mL正己烷后充分混匀溶解，待净化；把SPE小柱装入固相萃取装置中，依次用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化小柱；将待净化液上样到小柱上，再用2mL正己烷润洗烧杯，也上样到柱上；用10mL正己烷分两次润洗烧杯并转移到小柱上，淋洗小柱，弃去淋洗液；用5mL二氯甲烷洗脱，并用玻璃离心管收集；在40℃下氮气吹干，移液枪准确加入1mL乙腈定容；将定容好的分析液超声1min，再旋涡混合10s，转移到样品瓶中，待上机检测。
3 结果与分析
3.1 标准曲线及线性范围 将浓度为1μg/L、4μg/L、8μg/L、12μg/L、20μg/L5个标准系列溶液上机测定，根据峰的积分面积绘制5点校正曲线。获得线性回归方程为
y=31.132 85x+3.345 26，线性范围为1.0～20μg/L，相关系数r2=0.999 95。
3.2 方法的准确度与精密度
3.2.1 准确度试验 选取市售2款花生油进行测定，平行测定6次，测得样品中苯并（α）芘的重复性及RSD见表1，表明该方法具有良好的重现性。
3.2.2 精密度试验 取市售阴性样品，分别进行3个浓度的加标试验，每个加标浓度样品平行测定6次，测得回收率见表2，表明该方法具有较高的准确度和精密度。
3.3 方法的检出限及定量限 取阴性样品作为加标试样，加标量为1μg/kg。对该加标水平进行10次平行测定，数据见表3。由表3可知，方法检出限为0.15μg/kg，方法定量限为0.50μg/kg。标准曲线线性范围为1.0～20μg/kg，浓度为1.0μg/kg的样品10次平行平均值为0.94μg/kg，回收率为94%，故设定本检测中心的报告限为1.0μg/kg，即可满足检测中心各类样品限值要求。
4 结论
本研究通过对食用油脂苯并（α）芘含量检测方法进行优化，选用了固相萃取法作为测定植物油中苯并（α）芘的前处理方法，实验步骤简单，试剂消耗量少，检测时间大大缩短，检测成本低，并且方法重现性良好、加标回收率较高，具有较高的精密度和准确度，从而为食用植物油的安全性检测提供了技术保障。
参考文献
[1]信维平.苯并芘的致癌性及快速检测[J].研究与实验，2008（8）：16-17.
[2]杨美娟.浅析3，4-苯并芘的危害及其预防[J].农产品加工，2011（2）：71-72.
[3]GB/T 22509-2008 动植物油脂苯并（α）芘的测定反向高效液相色谱法[S].
[4]吴永宁.现代食品安全科学[M].北京：化学工业出版社，2003.
[5]赵月兰，秦建华.苯并芘对动物性食品的污染与检测[J].中国动物检疫，1996，13（2）：15-16.
[6]王浩，刘艳琴.高效液相色谱法测定粮食中苯并芘残留的研究[J].粮油食品科技，2007，15（1）：53-54. （责编：张宏民）
关键词：食用植物油苯并（α）芘（Bap）；固相萃取；高效液相色谱法
中图分类号 TS227 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）06-0163-02
1 引言
食用植物油是人们日常生活必需食品之一，而食用油中苯并（α）芘若超出限量标准，会造成对人们的身体健康造成不可逆转的伤害，被认为是高活性致癌剂，过量食入后将对人体造成严重的影响，因此各国对食用油中苯并（α）芘都有严格的使用限量规定。食用植物油苯并（α）芘以往采用人工填充中性氧化铝玻璃层析柱，样品前处理繁琐、时间长、消耗的试剂多，操作损失高，准确性和回收率均不理想。本文使用SPE小柱替代人工填充中性氧化铝玻璃层析柱、并通过对洗脱溶剂的优化进行预处理，应用高效液相色谱法进样进行检测，以期建立简便、快速、准确的检测方法。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂 Agilent 1260液相色谱仪（配荧光检测器），Sartorius BSA124S电子天平，Anpel DC-24氮吹仪，Vortex XH-B漩涡混匀器，昆山市超声仪器 KQ-300TDV超声波清洗器，Waters 20位固相萃取装置，Anpelcnw BAP苯并（α）芘SPE小柱。正己烷、二氯甲烷、丙酮、乙腈（色谱纯），实验用水为一级水。苯并（α）芘标准品（1mg/mL），Anpel。
2.2 标准溶液配制
2.2.1 标准储备液 准确吸取苯并（α）芘标准品0.1mL于10mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，浓度为10μg/mL。
2.2.2 标准工作液1 准确吸取0.1mL标准储备液于10mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，浓度为0.1μg/mL。
2.2.3 标准工作液2 将标准工作液1用丙酮稀释成1μg/L、4μg/L、8μg/L、12μg/L、20μg/L5个标准系列溶液。
2.3 液相色谱参考条件 色谱柱：多环芳烃分析柱，4.6mm×250mm，粒度5μm；进样量：20μL；流动相∶乙腈∶水为9∶1（体积比）；流速：1mL/min；柱温：30℃；荧光检测器：发射波长410nm，激发波长380nm。
2.4 样品前处理 准确称取0.5g植物油样于烧杯中，加入3mL正己烷后充分混匀溶解，待净化；把SPE小柱装入固相萃取装置中，依次用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化小柱；将待净化液上样到小柱上，再用2mL正己烷润洗烧杯，也上样到柱上；用10mL正己烷分两次润洗烧杯并转移到小柱上，淋洗小柱，弃去淋洗液；用5mL二氯甲烷洗脱，并用玻璃离心管收集；在40℃下氮气吹干，移液枪准确加入1mL乙腈定容；将定容好的分析液超声1min，再旋涡混合10s，转移到样品瓶中，待上机检测。
3 结果与分析
3.1 标准曲线及线性范围 将浓度为1μg/L、4μg/L、8μg/L、12μg/L、20μg/L5个标准系列溶液上机测定，根据峰的积分面积绘制5点校正曲线。获得线性回归方程为
y=31.132 85x+3.345 26，线性范围为1.0～20μg/L，相关系数r2=0.999 95。
3.2 方法的准确度与精密度
3.2.1 准确度试验 选取市售2款花生油进行测定，平行测定6次，测得样品中苯并（α）芘的重复性及RSD见表1，表明该方法具有良好的重现性。
3.2.2 精密度试验 取市售阴性样品，分别进行3个浓度的加标试验，每个加标浓度样品平行测定6次，测得回收率见表2，表明该方法具有较高的准确度和精密度。
3.3 方法的检出限及定量限 取阴性样品作为加标试样，加标量为1μg/kg。对该加标水平进行10次平行测定，数据见表3。由表3可知，方法检出限为0.15μg/kg，方法定量限为0.50μg/kg。标准曲线线性范围为1.0～20μg/kg，浓度为1.0μg/kg的样品10次平行平均值为0.94μg/kg，回收率为94%，故设定本检测中心的报告限为1.0μg/kg，即可满足检测中心各类样品限值要求。
4 结论
本研究通过对食用油脂苯并（α）芘含量检测方法进行优化，选用了固相萃取法作为测定植物油中苯并（α）芘的前处理方法，实验步骤简单，试剂消耗量少，检测时间大大缩短，检测成本低，并且方法重现性良好、加标回收率较高，具有较高的精密度和准确度，从而为食用植物油的安全性检测提供了技术保障。
参考文献
[1]信维平.苯并芘的致癌性及快速检测[J].研究与实验，2008（8）：16-17.
[2]杨美娟.浅析3，4-苯并芘的危害及其预防[J].农产品加工，2011（2）：71-72.
[3]GB/T 22509-2008 动植物油脂苯并（α）芘的测定反向高效液相色谱法[S].
[4]吴永宁.现代食品安全科学[M].北京：化学工业出版社，2003.
[5]赵月兰，秦建华.苯并芘对动物性食品的污染与检测[J].中国动物检疫，1996，13（2）：15-16.
[6]王浩，刘艳琴.高效液相色谱法测定粮食中苯并芘残留的研究[J].粮油食品科技，2007，15（1）：53-54. （责编：张宏民）