【摘 要】
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目的 构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子RevS基因敲除突变体,研究基因敲除后对细菌基本生物学性状及对小鼠和猪的致病性的影响.方法 构建中间为壮观霉素抗性基因,两
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,南京农业大学动物医学院
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目的 构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子RevS基因敲除突变体,研究基因敲除后对细菌基本生物学性状及对小鼠和猪的致病性的影响.方法 构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为RevS编码基因上、下游同源序列的基因敲除载体,通过同源重组和PCR法鉴定,获得Revs编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代的突变株.体外观察基因敲除后细菌的稳定性、生长曲线、菌落形态、溶血性、染色情况、镜下形态及蛋白表达等基本生物学性状有无发生明显改变.以108CFU野毒株和缺失株分别感染BALB/c小鼠和20日龄仔猪,观察致病性有无明显区别.结果 PCR分析显示RevS编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除后细菌的基本生物学性状无明显改变.动物感染实验显示,RevS缺失株对小鼠的致病性显著减弱,但对其主要宿主猪的致病性未见显著改变.结论 成功构建了猪链球菌2型强毒株05ZYH33反应调控因子RevS基因敲除突变株,基因敲除后未明显影响细菌的基本生物学性状,但对小鼠和猪的致病性有所减弱.
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