【摘 要】
：
试验旨在利用Tild-CRISPR/Cas9系统介导的同源重组技术制备纯合无角种公牛细胞系.针对控制无角性状的Pc靶位点设计sgRNA,T7E1酶切和测序检测突变效率;以pUC57为骨架连接Pc片
【机 构】
：
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193
论文部分内容阅读
试验旨在利用Tild-CRISPR/Cas9系统介导的同源重组技术制备纯合无角种公牛细胞系.针对控制无角性状的Pc靶位点设计sgRNA,T7E1酶切和测序检测突变效率;以pUC57为骨架连接Pc片段及其两侧约800 bp的同源序列左臂(L)和右臂(R),双酶切获得同源重组片段后与sgRNA共同转染至荷斯坦种公牛耳缘成纤维细胞中,筛选获得单细胞克隆并鉴定.结果显示,试验成功构建了6个sgRNA(1-6),并筛选获得了突变效率最高的sgRNA1,其突变效率为32.6％;成功获得了长度为1901 bp基因序列完全正确的同源重组片段;共获得147个单细胞克隆,其中8个单细胞克隆发生正确的单等位Pc位点插入,1个单细胞克隆发生正确的双等位Pc位点插入.外源基因残留检测结果显示,单细胞克隆没有C as9基因残留,可作为后续克隆生产优秀无角纯合胚胎的核供体细胞.本研究成功利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑的方法获得了Pc位点纯合插入的无外源Cas9基因残留的无角牛耳缘成纤维细胞系,为将来优秀无角体细胞克隆种公牛的培育以及主要功能基因研究提供了良好的材料储备和技术平台.
其他文献
试验旨在利用色谱-质谱联用(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)代谢组学技术分析植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物,并探索其互作发酵机制。分别采取植物乳杆菌发酵黄芪(FT组)和未发酵黄芪固态粉末(CT组),经样本前处理、LC-MS分析、生物学信息分析等探寻差异代谢物并分析代谢通路。结果显示,总离子流图峰图重现性良好,发酵黄芪主要代谢物共鉴定出183种代谢成分,正离子和负离子模式样品间关系PCA图均能良好区分。火山图分析表明,FT和CT组间的代谢物变化具有差异
为测定西宁野生动物园圈养的6只大鵟及6只雕鸮血液中生理生化指标及血清中部分维生素和矿物质的含量,本试验利用全自动血液细胞分析仪、血液生化仪、分光光度法及酶联免疫吸附试验分别对2种动物血液中生理生化指标参数和血清中维生素、矿物质等指标进行测定。结果显示,2种动物肝肾功能指标中白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、碱性磷酸酶(ALP)等指标差异性不显著(P>0.05);白细胞相关指标中大鵟的白细胞数(WBC)、淋巴细胞数(Lymph)、单核细胞数(MON)、中性粒细胞数(Gran)等均高于雕鸮,差异极显著(
为探究金丝小枣多糖(ZJP)对免疫抑制蛋雏鸡生长性能和免疫指标的影响,本试验将900只健康且体重相近的1日龄京红1号蛋鸡随机分为6组,每组6个重复,每个重复25只鸡。Ⅰ组为空白对照组,饲喂基础饲粮;Ⅱ~Ⅵ组在7~9日龄时注射100 mg/kg体重的环磷酰胺,每天1次,建立免疫抑制模型,并分别在基础饲粮中加入600 mg/kg黄芪多糖(APS)及0、400、800和1600 mg/kg ZJP。试验期为6周。结果显示,ZJP可在不同程度上显著缓解环磷酰胺导致的42日龄体重、22~42和1~42日龄的平均日增
为探究二甲双胍对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响,本研究将体外培养的牛骨骼肌卫星细胞分别用0(对照组)、1、2、4 mmol/L二甲双胍进行处理,采用CCK-8法筛选出二甲双胍作用于牛骨骼肌卫星细胞的最适浓度,接着通过EdU染色法检测二甲双胍处理牛骨骼肌卫星细胞后对其增殖的影响,然后对二甲双胍处理的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化,通过显微镜观察牛骨骼肌卫星细胞分化时期的细胞状态,然后利用Western blotting技术检测牛骨骼肌卫星细胞的分化标志因子肌球蛋白重链(MyHC)、肌细胞生成素(My
为了明确1例小熊猫死亡的原因,为小熊猫同样病例的临床诊疗提供借鉴,本试验通过临床诊断、血常规和生化检查、影像学检查、组织器官剖检、病理组织切片、病原学检查等方法对该病例进行诊断分析,结果证实为大叶性肺炎,主要致病菌为金黄色葡萄球菌。本试验结果表明,加强日常饲养管理是预防该病的关键,野生动物在治疗上也应具备针对性特殊措施。
为更好了解吉林地区奶牛子宫内膜炎的发病规律以及相关因素,以便科学有效地预防该病,本试验调查了2017-2019年吉林地区奶牛子宫内膜炎发病情况与地区、月份、胎次、产奶量、淘汰率、季节以及牧场饲养管理水平等因素之间的相关性,同时调查了奶牛子宫内膜炎病原菌特点。结果显示,吉林地区各市区奶牛子宫内膜炎发病率高低不一,舒兰市发病率最高,为60.26%,其次是永吉县47.41%,发病率最低的是吉林市区,发病率为15.88%;从月份统计奶牛子宫内膜炎发病情况看,7~10月份奶牛子宫内膜炎发病率较高,1月份发病率最低,
Background:Due to the high prevalence and complex etiology, bovine mastitis (BM) is one of the most important diseases to compromise dairy cow health and milk q
试验旨在探究褪黑素(MLT)对脂多糖(LPS)诱导的滩羊骨骼肌卫星细胞炎性反应的影响。选取滩羊妊娠30日龄胎儿为研究材料,使用Ⅳ型胶原酶分离获得滩羊骨骼肌卫星细胞并进行体外培养,添加相应的诱导试剂对滩羊骨骼肌卫星细胞进行诱导分化,利用免疫荧光检测骨骼肌卫星细胞表面标记物CD29、CD44、CD73及Vimentin的表达;在无胎牛血清的培养基中添加不同浓度(0、5、8和10μg/mL)的LPS培养骨骼肌卫星细胞,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子
为获得新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白单克隆抗体,本研究将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化重组蛋白,作为免疫原免疫小鼠,同时建立ELISA筛选方法对小鼠血清效价进行测定,筛选出血清抗体效价最高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,最终获得能稳定产生NDV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并进行了抗体的免疫荧光、Western blotting、亚类的鉴定、杂交瘤细胞染色体计数、小鼠腹水制备及腹水内单克隆抗体效价测定。结果显示,PCR、重组质粒测序及双酶切鉴定正确,M基
试验旨在筛选肉鸡弯曲杆菌特异性裂解型噬菌体并对其在肉鸡生产中的合理应用进行探讨。从肉鸡屠宰场收集弯曲杆菌噬菌体筛选样本,通过与当地肉鸡弯曲杆菌流行株共孵育、增殖、纯化获得特异性弯曲杆菌噬菌体。对上述弯曲杆菌噬菌体生物学特性(宿主范围、致死曲线、形态学特征等)进行鉴定;将筛选得到的弯曲杆菌噬菌体作为饲料添加剂,以5×107、1×108、5×108、1×109和5×109PFU/d 5个添加量添加于3