目的:建立独活HPLC指纹图谱并测定独活中二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素、二氢欧山芹醇当归酸酯的含量,为独活的质量控制提供参考。方法:采用SWELL Chromplus^TMC₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈（A）-0.2%醋酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0⁵ min,15%→20%A;5²0 min,20%→27%A;20⁴5 min,27%A;45⁵5 min,27%→30%A;55⁵6 min,30%→41%A;56⁶0 min,41%A;60⁷0 min,41%→50%A;70⁹0 min,50%→55%A;90⁹5 min,55%→15%A;95¹00 min,15%A）,流速1.0 mL·min^-1,检测波长325 nm,柱温25℃。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"建立指纹图谱并进行相似度评价,利用SPSS 20.0软件进行聚类分析。对二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量测定进行方法学考察。结果:建立了独活的指纹图谱,标定了21个共有峰,18批独活药材与对照图谱的相似度均≥0.85,聚类分析将其分为3类。二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素和二氢欧山芹醇当归酸酯线性范围分别为2.250³6.000、34.500⁵52.000、1.375²2.000和9.375¹50.000μg·mL^-1,线性关系良好（r≥0.999 7）;重复性试验RSD<2%,平均加样回收率在94.1%¹00.6%之间。18批样品中二氢欧山芹醇、蛇床子素、异欧前胡素和二氢欧山芹醇当归酸酯的含量分别为0.009 3%⁰.110 1%,0.498 9%¹.664 1%,0.007 1%⁰.045 0%和0.065 4%⁰.569 0%。结论:独活指纹图谱专属性强,结合4个香豆素类成分的含量测定可较全面控制独活的质量。