【摘 要】
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目的构建小鼠肝癌相关抗原SMP30基因的慢病毒重组子,经体外转染小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)后,检测SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。方法运用基因重组技术,将小鼠SM
【机 构】
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广西医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室
【基金项目】
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2017年广西自然科学基金项目(编号:2017GXNSFAA198079):Kinectin-HSP70融合基因修饰DC诱生CTL抗肝癌作用研究;广西高校重点实验室人体发育与疾病(编号:0102402214009C)基金资助
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目的构建小鼠肝癌相关抗原SMP30基因的慢病毒重组子,经体外转染小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)后,检测SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。方法运用基因重组技术,将小鼠SMP30基因连接到带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体Lentivirus中,将上述重组子感染小鼠DC并用荧光显微镜观察感染效果。用流式细胞仪检测感染前后的DC表面分子的差异,判断SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。结果将该重组子转染DC后,在荧光倒置显微镜下可观察到被转染的DC有绿色荧光蛋白(GFP)高表达,SMP30慢病毒重组子滴度为4×108TU/mL。流式细胞仪检测表明转染后DC表面CD80的表达高于感染前对照组(P<0.05),DC表面CD123表达高于CD11c(P<0.05)。结论成功构建了表达小鼠SMP30的慢病毒重组子,并有效转染小鼠DC使其稳定表达SMP30基因,实验用到的DC主要是DC123型的DC,DC转染SMP30慢病毒重组子后表面CD80表达升高,表明SMP30慢病毒重组子能促进DC的成熟。
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