【摘 要】
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目的 构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果.方法 将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载
【机 构】
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长春生物制品研究所生物技术室,长春,130062吉林大学第一医院呼吸科,长春,130021;吉林大学生命科学学院,长春,130012;
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目的 构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果.方法 将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载体多克隆位点处,再将乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)基因和IL-2基因分别连接在IRES基因的两侧,构建出乙肝病毒DNA疫苗pHII.将pHII转染COS-7细胞,进行瞬时表达.大量提取质粒后,按0、2、4周程序免疫BALB/c小鼠,以pVAX1质粒为阴性对照,pVAX/HBsAg质粒为阳性对照.第1针免疫1周后开始眼眶采血,检测血清中HBsAg和HBsAb含量.第1针免疫13周后处死小鼠,用流式细胞仪检测其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量.结果 在转染pHII质粒的COS-7细胞上清液中检测到HBsAg和IL-2的表达.实验组和阳性对照组小鼠分别于第1针免疫2、4周后,在血清中检测出HBsAb,但阴性对照组未测出.以上3组均未检测出HBsAg.实验组与阳性对照组相比,产生抗体的时间提前2周,抗体阳转率提高2.5倍,产生抗体的量也提高了近3倍.实验组CD4+分子数量和CD4+/CD8+值均高于阳性对照组.结论 乙肝病毒DNA疫苗pHII成功诱导出小鼠的免疫应答,其免疫效果明显优于不含分子佐剂的乙肝DNA疫苗.
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