浊点萃取结合UPLC-MS/MS法测定气道炎症模型豚鼠灌胃射干提取物后血浆中LTB4的浓度

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目的:建立测定气道炎症豚鼠血浆中白三烯B4(LTB4)浓度的方法,考察给予射干提取物后其对豚鼠血浆中LTB4浓度的影响,为阐明射干提取物抗炎止咳的作用机制提供参考。方法:将30只豚鼠随机分为空白组、模型组和射干提取物组,每组10只。除空白组外,其余2组豚鼠采用烟熏+合胞病毒滴鼻法制造气道炎症模型。造模结束后次日,射干提取物组豚鼠灌胃给药(10mg/kg射干提取物,以野鸢尾黄素计),空白组和模型组豚鼠灌胃等体积生理盐水,每天给药1次,连续给药7 d,末次给药后收集血浆样品。分别考察表面活性剂Triton X-114浓度、盐酸浓度、盐酸加入量、平衡温度和平衡时间对LTB4提取回收率的影响(以44.5g/L的牛血清白蛋白生理盐水溶液替代空白血浆),确定最优浊点萃取工艺进行生物样品处理。然后以吲哚美辛为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定血浆中LTB4浓度。色谱条件:色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18,流动相为0.2%甲酸水-乙腈(40∶60,V/V),流速为0.4 m L/min,柱温为40℃,进样量为5μL;MS条件:电喷雾离子源,正离子模式下扫描,LTB4用于定量的离子为[M+H]+质荷比(m/z)335.219 4→195.099 8,吲哚美辛为[M+H]+m/z 356.083 6→312.084 2。结果:浊点萃取最优条件为Triton X-114浓度5%,加入0.3 mol/L盐酸50μL调至酸性、平衡温度50℃,平衡时间20 min。在该含量测定条件下方法学验证结果均符合相关要求。与空白组比较,模型组豚鼠血浆中LTB4浓度显著升高(P<0.05);与模型组比较,射干提取物组豚鼠血浆中LTB4浓度显著降低(P<0.05)。结论:本研究中样品处理方法绿色环保,含量检测方法灵敏度高、准确性好,适用于血浆中LTB4浓度的测定;射干提取物可使气道炎症豚鼠血浆中升高的LTB4浓度得到显著回调。
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