慢病毒表达载体的构建及沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达

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目的:构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达.方法:根据FOXQ1基因的序列,设计合成3对shRNA干扰序列,退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro,将重组质粒转化至STBl3感受态中,涂板培养挑取单菌落,摇菌后小提质粒,选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提,将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev、pMDlg-pRRE和pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞,收集病毒上清,感染目的细胞DLD-1,嘌呤霉素筛选FOXQ1沉默细胞
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