【摘 要】
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目的:制备河豚毒素(TTX)的小鼠多克隆抗体,研究抗体中和TTX的效果,以探讨开发TTX抗素素的可能.方法:以中国鲎血蓝蛋白(TTH)为载体,通过甲醛与TTX化学连接,制成人工抗原(TTX-T
【机 构】
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军事医学科学毒物药物研究所,北京,100850;白求恩军医学院,河北省,石家庄市,050081
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目的:制备河豚毒素(TTX)的小鼠多克隆抗体,研究抗体中和TTX的效果,以探讨开发TTX抗素素的可能.方法:以中国鲎血蓝蛋白(TTH)为载体,通过甲醛与TTX化学连接,制成人工抗原(TTX-TTH)并免疫BALB/c小鼠;以福氏佐剂诱导腹水抗体.酶联免疫分析方法检测血清和腹水抗体质量;将TTX与抗体在体外共温育而被中和,然后腹腔注射于KM小鼠,作体内攻毒实验,检验抗体的抗毒活性,并计算抗体的免疫当量.结果:经人工抗原免疫并福氏佐剂诱导,获得了20株具有不同亲和力的腹水抗体,与血清抗体具有同质性,其表观亲和力为10-4～10-7M.抗体可在体外和体内、完全或部分地中和毒素的毒性,有效保护中毒动物免于死亡.抗体体外中和毒素,最高可保护1.5×LD的TTX攻击,动物全部活存(1LD=14 μg/kp,i.p.);抗体的最高免疫当量达1 300 μg TTX/L腹水;抗体的抗毒活性与抗体滴度、亲和力和质量因子显著相关(分别为P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).抗体在体内预防4 d时,可保护1.3×LD的TTX攻击动物活存.结论:TTX小鼠腹水多克隆抗体可在体外和体内有效中和毒素,其抗毒活性依赖于抗体质量,提示了免疫防治对抗河豚毒素中中毒的希望.研究提出的抗体“质量因子”是评价抗毒素质量的有效参数.
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