【摘 要】
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目的 建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术。方法 利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞 ,各置于 0 2ml簿壁反应管的裂解液中 ,合成针对抑癌基因P53第
【机 构】
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首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心; 协和医科大学基础医学院病理生理学研究室 100020;
【基金项目】
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北京市自然科学基金资助课题(JS96 0 0 4 )
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目的 建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术。方法 利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞 ,各置于 0 2ml簿壁反应管的裂解液中 ,合成针对抑癌基因P53第5～ 9外显子 (e)的引物 ,运用 1 5mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增 ,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应 (PCR)扩增P53基因第e5～ 9的 1 90 0bp片段及含第 5 ,6外显子的 580bp片段。并用ABI 377测序仪测定其序列。结果 运用稀释至 0 0 1ng的基因组DNA扩增 1 90 0bp片段 ,优化PCR的条件。分别从 30个单个纤维母细胞扩增上述 1 90 0bp片段 ,1 0个获得 1 90 0bp片段 ,成功率为 33 %。扩增 580bp片段 ,则阳性率可达 60 %。序列分析证明确为人P53基因第 5 ,6外显子序列。结论 运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段 ,并测定其序列 ,作出基因诊断
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